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Ex?(nm)	498	Em?(nm)	522

Cell Meter TUNEL凋亡檢測(cè)試劑盒 DN段化代表晚期細(xì)胞凋亡的特征。凋亡細(xì)胞中的DNA斷裂可以通過(guò)末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶（TdT）介導(dǎo)的dUTP缺口末端標(biāo)記（TUNEL）檢測(cè)。 TUNEL測(cè)定法依賴(lài)于DNA中存在的缺口，該缺口可通過(guò)TdT進(jìn)行鑒定，TdT是一種酶，該酶催化添加標(biāo)記物的dUTP?，F(xiàn)有的所有TUNEL分析均包含劇毒的甲胂酸鈉，這可能會(huì)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡并降低DNA的產(chǎn)生和DNA鏈。我們的Cell Meter TUNEL細(xì)胞凋亡測(cè)定試劑盒使用了不含甲胂酸鈉的專(zhuān)有緩沖系統(tǒng)。該試劑盒基于將我們專(zhuān)有的熒光染料摻入凋亡過(guò)程中形成的DN段中。該測(cè)定法經(jīng)過(guò)優(yōu)化，可直接檢測(cè)分離的或貼壁細(xì)胞中的細(xì)胞凋亡，而無(wú)需使用任何抗體。該試劑盒為所有必需成分提供了優(yōu)化的測(cè)定方案。適用于熒光酶標(biāo)儀，熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀。在流行的FITC通道上可以輕松檢測(cè)到其信號(hào)。百螢生物是AAT Bioquest的中國(guó)代理商，為您提供的Cell Meter TUNEL凋亡檢測(cè)試劑盒。

樣品實(shí)驗(yàn)方案

簡(jiǎn)要概述

用測(cè)試化合物準(zhǔn)備細(xì)胞。
與TUNEL工作溶液在37°C下孵育30分鐘至1小時(shí)。
洗滌細(xì)胞。
用4％甲醛（可選）固定細(xì)胞。
用帶FITC濾光片的熒光顯微鏡或帶FITC通道的流式細(xì)胞儀。讀取Ex / Em = 490/525 nm（截止= 515 nm）處的熒光強(qiáng)度。

溶液配制

工作溶液配制

將0.5μL的100X Tunnelyte Green（組分A）添加到50μL的反應(yīng)緩沖液（組分B）中，使總體積為50.5μL的TUNEL工作溶液。避光。注意：應(yīng)單獨(dú)評(píng)估每個(gè)細(xì)胞系，以確定細(xì)胞密度。

實(shí)驗(yàn)步驟

1.根據(jù)您的特定協(xié)議，將細(xì)胞培養(yǎng)至密度以誘導(dǎo)凋亡。對(duì)于在96孔板培養(yǎng)物中生長(zhǎng)的貼壁細(xì)胞，我們建議大約30,000至50,000個(gè)細(xì)胞/孔，對(duì)于非貼壁細(xì)胞，建議大約1至2 x 106細(xì)胞/ mL。同時(shí)，在每種標(biāo)記條件下，用誘導(dǎo)群體相同的密度培養(yǎng)非誘導(dǎo)陰性對(duì)照細(xì)胞群體。注意：我們用100 nM-1 µM星形孢菌素處理HeLa細(xì)胞4小時(shí)，以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。

2.染色和固色：

2.1取出細(xì)胞培養(yǎng)基。
2.2向每個(gè)樣品中添加50µL TUNEL工作溶液。
2.3在37°C下孵育30-60分鐘。
2.4除去TUNEL工作溶液，并用200 µL /孔的PBS洗滌細(xì)胞1-2次。
2.5向每個(gè)樣品中添加100uL反應(yīng)緩沖液（組分B）。
2.6使用Ex / Em = 490/525 nm（cut off= 515 nm）的熒光酶標(biāo)儀，帶有FITC濾光片組的熒光顯微鏡或帶有FITC通道的流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光強(qiáng)度。
2.7可選：從步驟5中移出反應(yīng)緩沖液，并向每個(gè)孔中添加100 µL /孔/ 96孔板的4％甲醛固定緩沖液（未提供）。注意：對(duì)于非貼壁細(xì)胞，請(qǐng)?zhí)砑铀枇浚ɡ?X106細(xì)胞/ mL）的4％甲醛固定液。
2.8在室溫下將平板孵育20至30分鐘。
2.9去除固定劑。
2.10用PBS洗滌細(xì)胞2-3次，并用100µL PBS /孔/ 96孔板替換。
2.11使用Ex / Em = 490/525 nm（cut off= 515 nm）的熒光酶標(biāo)儀，帶有FITC濾光片組的熒光顯微鏡或帶有FITC通道的流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光強(qiáng)度。
2.12可選：用1X Hoechst（組分C）在Ex / Em = 350/460 nm處染色細(xì)胞核，以進(jìn)行圖像分析