實(shí)驗(yàn)方案

簡要概述

用5×105到1×106細(xì)胞/ mL 的密度制備含測試化合物的細(xì)胞

準(zhǔn)備ThiolTrace Violet 500工作溶液并將其添加到細(xì)胞中

在37℃孵育20至30分鐘

在Ex / Em = 405/525 nm處讀取熒光強(qiáng)度（Pacific Orange濾光片組）

溶液配制

儲備溶液配制

ThiolTrace Violet 500儲備液（500X）：
在ThiolTrace Violet 500 的小瓶中加入200 µL DMSO（組分C）。注意：分裝并在-20℃儲存未使用的ThiolTrace Violet 500，避免反復(fù)冷凍/解凍循環(huán)。

工作溶液配制

ThiolTrace Violet 500工作溶液（1X）：
將2 µL ThiolTrace Violet 500儲備溶液添加到1 mL的測定緩沖液（組分B）或您自備的緩沖液中，并充分混合。注意：ThiolTrace Violet 500 工作溶液可以在含有血清的細(xì)胞培養(yǎng)基中制備。

操作步驟

1. 對于貼壁細(xì)胞，用0.5 mM EDTA輕輕提起細(xì)胞以保持細(xì)胞完整，在使用ThiolTrace Violet 500工作溶液孵育之前，用含血清的培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞一次。 注意：孵育時間取決于所用的細(xì)胞類型和細(xì)胞濃度。
   
   

2. 將細(xì)胞以1000 rpm的速度離心4分鐘，然后用1 mL緩沖液（可選）洗滌細(xì)胞。
   
   

3. 將細(xì)胞重懸于1 mL ThiolTrace Violet 500工作溶液中，并在37℃的培養(yǎng)箱中孵育20至30分鐘。
   
   

4. 使用Pacific Orange濾光片組（Ex / Em = 405/525 nm），用流式細(xì)胞儀檢測熒光強(qiáng)度。