樣品實(shí)驗(yàn)方案

簡(jiǎn)要概述

1. 加入相同體積的CytoCalcein™Violet 450，AM工作溶液（100 µL /孔/ 96孔板或25 µL /孔/ 384孔板）

2. 監(jiān)測(cè)Ex / Em = 405/460 nm（截止= 435 nm）的熒光強(qiáng)度（底部讀取模式）

溶液配制

儲(chǔ)備溶液配制

CytoCalcein™Violet 450，AM儲(chǔ)備溶液：

將20 µL DMSO（組分B）添加到CytoCalcein™Violet 450，AM（組分A）的小瓶中，并充分混合以制成CytoCalcein™Violet 450，AM儲(chǔ)備溶液。注意：20 µL CytoCalcein™Violet 450，AM儲(chǔ)備液足以裝滿一塊板。避光。為了存放，請(qǐng)將管子緊緊密封。

工作溶液配制

將CytoCalcein™Violet 450，AM儲(chǔ)備溶液的全部?jī)?nèi)容物（20 µL）加入10 mL的測(cè)定緩沖液（組分C）中，并充分混合以制成CytoCalcein™Violet 450，AM工作溶液。該CytoCalcein™Violet 450，AM工作溶液在室溫下至少可穩(wěn)定2小時(shí)。注意：如果諸如CHO細(xì)胞之類的細(xì)胞含有能促進(jìn)熒光染料隨時(shí)間滲漏的有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，則應(yīng)制備丙*舒儲(chǔ)備溶液并以孔內(nèi)工作濃度范圍為1至1的濃度添加到上樣緩沖液中。 2.5毫米 分裝并保存未使用的丙*舒儲(chǔ)備溶液于≤-20°C。

操作步驟

1. 根據(jù)需要用測(cè)試化合物處理細(xì)胞。注意：添加化合物之前不必洗滌細(xì)胞。但是，如果測(cè)試的化合物對(duì)血清敏感，則可以在添加化合物之前將生長(zhǎng)培養(yǎng)基和血清因子吸掉。加入100 µL /孔（96孔板）和25 µL /孔（384孔板）的1X Hank鹽溶液和20 mM Hepes緩沖液（HHBS）或抽吸后選擇的緩沖液?；蛘?，細(xì)胞可以在無(wú)血清培養(yǎng)基中生長(zhǎng)。

2. 加入100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的CytoCalcein™Violet 450，AM工作溶液。

3. 在避光的條件下，于室溫或37°C下孵育平板1小時(shí)。（孵育時(shí)間可能是15分鐘到過(guò)夜。孵育時(shí)間少于4小時(shí)，我們獲得了結(jié)果）。 注意：適當(dāng)?shù)姆跤龝r(shí)間取決于所用的單個(gè)細(xì)胞類型和細(xì)胞濃度。優(yōu)化每個(gè)實(shí)驗(yàn)的孵育時(shí)間。 注意： 加載后請(qǐng)勿洗滌細(xì)胞。 注意： 對(duì)于非貼壁細(xì)胞，建議在孵育后以800 rpm的速度離心細(xì)胞板2分鐘，然后制動(dòng)。

4. 使用熒光板讀數(shù)器（底部讀取模式）在Ex / Em = 405/460 nm（截止= 435 nm）下監(jiān)控?zé)晒鈴?qiáng)度。