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熒光量子產(chǎn)率測定試劑盒生物偶聯(lián)基團(tuán)是美國AAT Bioquest生產(chǎn)的熒光染料，當(dāng)熒光團(tuán)吸收光子時，就會形成能量激發(fā)態(tài)。熒光團(tuán)及其周圍環(huán)境的確切性質(zhì)，會影響該生物物種的形態(tài)，但結(jié)果是仍然是失活（能量損失）并返回基態(tài)。發(fā)生的主要失活過程是熒光（光子發(fā)射造成的能量損失）、內(nèi)轉(zhuǎn)換和振動弛豫（對周圍環(huán)境的熱量造成的非輻射能量損失）、與三重態(tài)流形交叉的系統(tǒng)間以及隨后的非輻射失活。熒光量子產(chǎn)率是吸收的光子與通過熒光發(fā)射的光子之比。換句話說，量子產(chǎn)率給出了激發(fā)態(tài)被熒光而不是被另一個非輻射機(jī)制失活的可能性。該試劑盒提供了測定生物偶聯(lián)物熒光量子產(chǎn)率的所有必要成分。該試劑盒針對對熒光蛋白偶聯(lián)物、肽、核苷酸和核酸的熒光量子產(chǎn)率的檢測進(jìn)行了優(yōu)化。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供優(yōu)質(zhì)的熒光量子產(chǎn)率測定試劑盒生物偶聯(lián)基團(tuán) 。

實驗方案

樣品實驗方案

表1

參考	水中的熒光量子產(chǎn)量	用以下染料或類似波長染料標(biāo)記的綴合物（用于參考標(biāo)準(zhǔn)選擇）
參考1	0.98	FAM, 6-TET, 6-HEX, 6-JOE, FITC, Cy®2, Alexa Fluor® 488 and 514, iFluor™ 488 and 514, DyLight™ 488, or other dyes that have an emission of 500 ± 50 nm
參考2	0.20	Cy3®, Alexa Fluor® 514, 532, 546 and 555, iFluor™ 514, 532 and 555, DyLight™ 555, TRITC, or other dyes that have an emission of 550 ± 50 nm
參考3	0.44	Texas Red®, Texas Red®-X, Alexa Fluor® 594, iFluor™ 594, California Red™, DyLight™ 594, or other dyes that have an emission of 600 ± 50 nm
參考4	0.24	Cy5®, Cy5.5®, Cy7®, Alexa Fluor® 633, 647, 700 and 750, iFluor™ 633, 647, 700 and 750, DyLight™ 650, 680 and 755, or other dyes that have an emission of 650 ± 50 nm

1.使用儲備溶液制備的稀釋溶液和水性緩沖液（例如PBS或TRIS）記錄所選標(biāo)準(zhǔn)品和測試樣品（0.1至5μM）的吸光度光譜。

2.根據(jù)吸收值選擇激發(fā)波長。我們建議使用以下公式來選擇所需的激發(fā)波長：
所需的激發(fā)（nm）=較短的吸收值* - 50nm
*例如，如果您的測試樣品在500 nm處具有吸收，并且所選參考標(biāo)準(zhǔn)在490 nm處具有吸收，則應(yīng)選擇440 nm（490 nm - 50 nm）作為激發(fā)波長。

3.調(diào)整所選參考標(biāo)準(zhǔn)品和測試樣品的濃度，使其在選定的激發(fā)波長下具有相同的吸光度（在0.2至0.8之間）。

4.使用相同的緩沖液或純水稀釋所選參考標(biāo)準(zhǔn)品與測試樣品進(jìn)行10倍稀釋（必須用相同比例稀釋）。

5.使用可以產(chǎn)生校準(zhǔn)熒光光譜的熒光分光光度計或酶標(biāo)儀在10mm熒光比色皿中記錄相同稀釋溶液的熒光光譜。注意：必須使用相同的儀器設(shè)置記錄所有熒光光譜。更改樣品之間的儀器設(shè)置將使量子產(chǎn)率的測量無效。

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