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小鼠β淀粉樣肽(1-42)定量檢測(cè) ELISA kit

時(shí)間:2012/2/1閱讀:898
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小鼠β淀粉樣肽(1-42)定量檢測(cè)試劑盒(ELISA)

使用說(shuō)明書

                                                                                                                            

【試劑盒名稱】

小鼠β淀粉樣肽(1-42)定量檢測(cè)試劑盒(ELISA)

 

【試劑盒用途】

定量檢測(cè)小鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中β淀粉樣肽(1-42)的含量。


 上海裕平生物科技公司高品質(zhì)ELISA試劑盒供應(yīng)商,品質(zhì),價(jià)格實(shí)惠,售后完善,并提供免費(fèi)代檢測(cè)服務(wù)。
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【檢測(cè)原理】

本試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)。將標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)樣本加入到預(yù)先包被小鼠β淀粉樣肽(1-42)抗體的透明酶標(biāo)包被板中,溫育足夠時(shí)間后,洗滌除去未結(jié)合的成分,再加入酶標(biāo)工作液,溫育足夠時(shí)間后,洗滌除去未結(jié)合的成分。依次加入底物A、B,底物(TMB)在辣根過(guò)氧化物酶(HRP)催化下轉(zhuǎn)化為藍(lán)色產(chǎn)物,在酸的作用下變成黃色,顏色的深淺與樣品中小鼠β淀粉樣肽(1-42)濃度呈正相關(guān),450nm波長(zhǎng)下測(cè)定OD值,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的OD值,計(jì)算樣本中小鼠β淀粉樣肽(1-42)含量。

 

【試劑盒組成】

1

酶標(biāo)包被板

12×8

7

顯色劑A

6mL

2

標(biāo)準(zhǔn)品:24pg/mL

0.6mL

8

顯色劑B

6mL

3

20倍濃縮洗滌液

25mL

9

終止液

6mL

4

標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

6mL

10

說(shuō)明書

1

5

樣本稀釋液

6mL

11

封板膜

2

6

酶標(biāo)試劑

6mL

12

密封袋

1個(gè)

備注:標(biāo)準(zhǔn)品用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液依次稀釋為:2412、63、1.5、0.75pg/mL

 

【需要而未提供的試劑和器材】

1、37恒溫箱

2、標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀

3、精密移液器及一次性吸頭

4、蒸餾水

5、一次性試管

6、吸水紙

 

【操作步驟】

1、準(zhǔn)備:從冰箱取出試劑盒,室溫復(fù)溫平衡30分鐘。

2、配液:用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。

3、加標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣本:取足夠數(shù)量的酶標(biāo)包被板,固定于框架上,分別設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣本孔和空白對(duì)照孔,記錄各孔位置,在標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μL;待測(cè)樣本孔中先加入待測(cè)樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL(即樣本稀釋5倍);空白對(duì)照孔不加。

4、溫育:37水浴鍋或恒溫箱溫育30min。

5、洗板:棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板4次(也可用洗板機(jī)按說(shuō)明書操作洗板)。

6、加酶標(biāo)工作液:每孔加入酶標(biāo)工作液50μL,空白對(duì)照孔不加。

7、溫育:重復(fù)4的操作。

8、洗板:重復(fù)5的操作。

9、顯色:每孔先加入顯色劑A 50μL,再加入顯色劑B 50μL,37避光顯色15min。

10、終止:取出酶標(biāo)板,每孔加終止液50μL,終止反應(yīng)(顏色由藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

11、測(cè)定:以空白孔調(diào)零,在終止后15分鐘內(nèi),用450nm波長(zhǎng)測(cè)量各孔的吸光值(OD值)。

12、計(jì)算:根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對(duì)應(yīng)的OD值,計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程,再根據(jù)樣本的OD值,在回歸方程上計(jì)算出對(duì)應(yīng)的樣品濃度,也可以使用各種應(yīng)用軟件來(lái)計(jì)算。zui終濃度為實(shí)際測(cè)定濃度乘以稀釋倍數(shù)。

 

【樣本要求】

1、樣本不能含疊氮鈉(NaN3),因?yàn)?/span>疊氮鈉(NaN3)是辣根過(guò)氧化物酶(HRP)的抑制劑。

2、標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能立即試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

3、樣本應(yīng)充分離心,不得有溶血及顆粒。

 

【注意事項(xiàng)】

1、實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格按照說(shuō)明書的操作進(jìn)行,實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。

2、酶標(biāo)包被板開封后如未用完,應(yīng)立即裝入密封袋中加干燥劑保存。

3、建議所有的標(biāo)準(zhǔn)品、樣本和空白對(duì)照都做雙份檢測(cè),取平均值,以減小實(shí)驗(yàn)誤差。

4、若顯色過(guò)淺,可適當(dāng)延長(zhǎng)底物溫育時(shí)間。

5、為避免交叉污染,標(biāo)準(zhǔn)品、樣本和空白對(duì)照每加一個(gè)就要更換一次吸頭;酶標(biāo)工作液、樣本稀釋液和底物等公共組分,要懸臂加樣,不得碰到微孔;不得重復(fù)使用封板膜

6、試劑盒保質(zhì)期內(nèi)使用,不同批號(hào)的試劑不得混用。

7、底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。

【操作程序總結(jié)】

 

準(zhǔn)備試劑,樣品和標(biāo)準(zhǔn)品

 


 

加入準(zhǔn)備好的樣品和標(biāo)準(zhǔn)品,37℃反應(yīng)30分鐘

 

洗板4次,加入酶標(biāo)試劑,37℃反應(yīng)30分鐘

 

洗板4次,加入顯色液A、B,37℃顯色15分鐘

 

加入終止液

 

15分鐘之內(nèi)讀OD

 

計(jì)算

 

【檢測(cè)范圍】

0.75-24pg/mL

【規(guī)格】

96人份/

【貯藏】

2-8℃,避光防潮保存。

【有效期】

6個(gè)月


   上海裕平生物科技有限公司主要經(jīng)營(yíng)各種品牌檔次的ELISA試劑盒,*,售后服務(wù)完善。并提供免費(fèi)代檢測(cè)。服務(wù)于高校及免疫學(xué)科研單位。技術(shù)人員更好的為您服務(wù)。
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