基質(zhì)金屬蛋白酶-7抗體，Anti-MMP-7

和液相色譜純化小鼠腹水中單克隆抗體
從小鼠腹水中純化McAb的方法有鹽析、離子交換層析、凝膠過濾和親合層析等。應(yīng)用TSK DEAE-SPW離子交換層析柱從小鼠腹水中純化McAb不僅純化速度快，回收率和得率高 ，而且保持良好的生物學(xué)活性。

（一）原理
根據(jù)離子交換原理，將經(jīng)硫酸銨粗提的含McAbγ球蛋白上樣結(jié)合于層析柱上，通過增加洗 
脫液中的離子強(qiáng)度，洗脫并收集蛋白峰。
（二）操作步驟
腹水離心10000 g,10min，除去細(xì)胞和雜質(zhì)，在4℃下逐滴加入飽和硫酸銨溶液，使終濃度為40%飽和硫酸銨
↓攪拌20～30min
離心，沉淀用40%飽和硫酸銨洗滌2次后溶于PBS，對(duì)緩沖液A（pH8.5, 
20mmol/L Tris緩沖液）透析除鹽
↓4℃過夜
用帶有1000μl樣品環(huán)的高壓加樣活門將透析后粗提物加樣于經(jīng)緩沖液A液平衡的TSK 
DEAE SPW離子交換層析柱
↓
洗脫流速1ml/min
0～1min ：0→5%緩沖液B（20nmol/L 
Tris, Ph 8.5,含2.0 
mol/L醋酸鈉）
1～2 min（ 線性梯度洗脫）：5→20%緩沖液B
20～22min：20→0%緩沖液B
↓
洗脫液用紫外280nm進(jìn)行監(jiān)測
↓
收集蛋白峰，進(jìn)行含量、純度和活性測定
（三）試劑和器材
（1）TSK 
DEAE SPW離子交換層析柱 （75mm×7.5mm,Bio 
Rad）
（2）液相色譜儀（包括控制系統(tǒng)、溶劑傳遞系統(tǒng)、高壓加壓活門和紫外280nm監(jiān)測系統(tǒng)）
（3）PBS，緩沖液A和B。
（四）注意事項(xiàng)
（1）所用緩沖液和加樣粗提物均需0.2μm濾膜過濾。
（2）在本實(shí)驗(yàn)條件下，IgG1峰一般在線性梯度洗脫開始11-12min。但不同類和亞類抗體以及不同特異性McAb 
的存留時(shí)間（retention 
time）有所差異。

基質(zhì)金屬蛋白酶-7抗體，Anti-MMP-7