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細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子X盒結(jié)合蛋白抗體相關(guān)信息

時間:2013-2-26閱讀:629
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細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子X盒結(jié)合蛋白抗體相關(guān)信息

 

抗體 (antibody, Ab) 
1
、抗體的概念: 
*
機(jī)體受到抗原刺激后,由漿細(xì)胞合成并分泌出一類具有與抗原發(fā)生特異性結(jié)合的球蛋白,被稱為抗體。 
-
抗體主要存在于血清內(nèi); 
-
抗體都是免疫球蛋白,但免疫球蛋白并不一定都是抗體。 
-
免疫球蛋白根據(jù)重鏈的結(jié)構(gòu)及抗原特異性不同分為五種,既IgG、 IgD、IgE、 IgAIgM。 

2
、免疫組化實(shí)驗中常用的抗體:單克隆抗體和多克隆抗體。 
*
單克隆抗體:是一個B淋巴細(xì)胞克隆分泌的抗體,是應(yīng)用細(xì)胞融合雜交瘤技術(shù)免疫動物制備的。 
-
特異性強(qiáng)、抗體產(chǎn)量高。 
*
多克隆抗體:是將純化后的抗原直接免疫動物后,從動物血中所獲得的免疫血清,是多個B淋巴細(xì)胞克隆所產(chǎn)生的抗體混合物。 
-
特異性低,會產(chǎn)生抗體的交叉反應(yīng)。 
-
多克隆抗體廣泛應(yīng)用于石蠟包埋組織切片,可減少假陰性染色機(jī)會。 
-
抗原與抗體的結(jié)合,要求量保持一定比例,當(dāng)抗原或抗體過量時,是不能聚合成大顆粒。 
3
、抗體的制備——多克隆抗體的制備 
*
動物的選擇 
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佐劑(adjuvant) 
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免疫方法 
*
免疫劑量 
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抗體效價的測定 
*
放血或定期抽血 
(1)
動物的選擇  細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子X盒結(jié)合蛋白抗體相關(guān)信息 
選擇什么動物來免疫取決于: 
*
所需抗血清的量 
-
小鼠只能提供1.01.5ml的血液,而山羊能提供幾升。 
*
能供免疫用的抗原量 
g
足夠,而山羊需要幾毫克。m-小鼠50 
(1)
動物的選擇續(xù) 
*
動物的品系:免疫動物與提供抗原的動物之間的種系差異越大越好。 
-
例如哺乳動物的抗原可選擇非哺乳動物來制備抗體。 
-
常用的動物有兔、羊、馬、豬等,以兔新西蘭兔,年輕,健壯,體重在2.5kg左右,雄性為zui常用。 
(2)
佐劑 (adjuvant) 
*
一般可溶性抗原注射后,迅速從注射部位擴(kuò)散、吸收代謝。佐劑可延長潴留時間,且延長免疫刺激作用。因此在制備抗體的過程中,常將抗原和佐劑一起注射。 
*
zui常用的佐劑是弗氏佐劑,又分為: 
-
弗氏不*佐劑(Freund's incomplete adjuvant) 
-
弗氏*佐劑(Freund's complete adjuvant) 
弗氏不*佐劑 

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