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細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子X盒結(jié)合蛋白抗體相關(guān)信息
抗體 (antibody, Ab)
1、抗體的概念:
*機(jī)體受到抗原刺激后,由漿細(xì)胞合成并分泌出一類具有與抗原發(fā)生特異性結(jié)合的球蛋白,被稱為抗體。
-抗體主要存在于血清內(nèi);
-抗體都是免疫球蛋白,但免疫球蛋白并不一定都是抗體。
-免疫球蛋白根據(jù)重鏈的結(jié)構(gòu)及抗原特異性不同分為五種,既IgG、 IgD、IgE、 IgA、IgM。
2、免疫組化實(shí)驗中常用的抗體:單克隆抗體和多克隆抗體。
*單克隆抗體:是一個B淋巴細(xì)胞克隆分泌的抗體,是應(yīng)用細(xì)胞融合雜交瘤技術(shù)免疫動物制備的。
-特異性強(qiáng)、抗體產(chǎn)量高。
*多克隆抗體:是將純化后的抗原直接免疫動物后,從動物血中所獲得的免疫血清,是多個B淋巴細(xì)胞克隆所產(chǎn)生的抗體混合物。
-特異性低,會產(chǎn)生抗體的交叉反應(yīng)。
-多克隆抗體廣泛應(yīng)用于石蠟包埋組織切片,可減少假陰性染色機(jī)會。
-抗原與抗體的結(jié)合,要求量保持一定比例,當(dāng)抗原或抗體過量時,是不能聚合成大顆粒。
3、抗體的制備——多克隆抗體的制備
*動物的選擇
*佐劑(adjuvant)
*免疫方法
*免疫劑量
*抗體效價的測定
*放血或定期抽血
(1) 動物的選擇 細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子X盒結(jié)合蛋白抗體相關(guān)信息
選擇什么動物來免疫取決于:
*所需抗血清的量
-小鼠只能提供1.0~1.5ml的血液,而山羊能提供幾升。
*能供免疫用的抗原量
g足夠,而山羊需要幾毫克。m-小鼠50
(1) 動物的選擇(續(xù))
*動物的品系:免疫動物與提供抗原的動物之間的種系差異越大越好。
-例如哺乳動物的抗原可選擇非哺乳動物來制備抗體。
-常用的動物有兔、羊、馬、豬等,以兔(新西蘭兔,年輕,健壯,體重在2.5kg左右,雄性)為zui常用。
(2) 佐劑 (adjuvant)
*一般可溶性抗原注射后,迅速從注射部位擴(kuò)散、吸收代謝。佐劑可延長潴留時間,且延長免疫刺激作用。因此在制備抗體的過程中,常將抗原和佐劑一起注射。
*zui常用的佐劑是弗氏佐劑,又分為:
-弗氏不*佐劑(Freund's incomplete adjuvant)
-弗氏*佐劑(Freund's complete adjuvant)
弗氏不*佐劑
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