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本試劑盒只能用于科學(xué)研究，不得用于醫(yī)學(xué)診斷
牛(Bovine)孕酮(PROG)ELISA檢測(cè)試劑盒
使用說明書
檢測(cè)原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) （ ELISA ） 。 往預(yù)先包 被孕酮（ PROG ）抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP 標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物 TMB 顯色， TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的孕酮（ PROG ）呈 正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（ OD 值 ） ，計(jì)算樣品濃度。
樣品收集、處理及保存方法
1. 血清 ： 使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管 ， 操作過程中避免任何細(xì)胞刺激 ， 收集血液后 ， 3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿 ： EDTA 、 檸檬酸鹽或肝素抗凝 。 3000 轉(zhuǎn)離心 30 分鐘取上清 。
3. 細(xì)胞上清液： 3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿 ： 將組織加入適量生理鹽水搗碎 。 3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘取上清。
5. 保存 ： 如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè) ， 請(qǐng)按一次用量分裝 ， 凍存于-20 ℃ ，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍 。

自備物品
1. 酶標(biāo)儀（ 450nm ）
2. 高精度加樣器及槍頭 ： 0.5-10uL 、 2-20uL 、 20-200uL 、 200-1000uL
3. 37 ℃ 恒溫箱
操作注意事項(xiàng)
1. 試劑盒保存在 2-8 ℃ ，使用前室溫平衡 20 分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶，這屬于正?，F(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再使用。
2. 實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中 ， 密封 （ 低溫干燥 ） 保存 。
3. 濃度為 0 的 S0 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品即可視為陰性對(duì)照或者空白；按照說明書操作時(shí)樣本已經(jīng)稀釋 5 倍，zui終結(jié)果乘以 5 才是樣本實(shí)際濃度。

4. 嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。
5. 所有液體組分使用前充分搖勻。
試劑盒組成
  名稱           96孔配置        48孔配置        備注
微孔酶標(biāo)板    12 孔 × 8 條    12 孔 × 4 條      無
標(biāo)準(zhǔn)品         0.3mL*6 管       0.3mL*6 管        無
*         6mL             3mL            無
檢測(cè)抗體 -HRP     10mL             5mL            無
20 × 洗滌緩沖液  25mL            15mL      按說明書進(jìn)行稀釋
底物 A             6mL             3mL            無
底物 B             6mL             3mL            無
終止液             6mL             3mL            無
封板膜            2 張            2 張            無
說明書            1 份            1 份            無
自封袋            1 個(gè)            1 個(gè)            無
注：標(biāo)準(zhǔn)品（ S0-S5 ）濃度依次 為： 0 、 1 00 、 2 00 、 4 00 、 8 00 、 16 00 pmol/ L
試劑的準(zhǔn)備
20 × 洗滌緩沖液的稀釋 ： 蒸餾水按 1 ： 20 稀釋 ， 即 1 份的 20 × 洗滌緩沖液加 19 份的蒸餾水。
洗板方法 
1. 手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置 1min 后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板 5 次。
2. 自動(dòng)洗板機(jī)：每孔注入洗液 350 μ L ，浸泡 1min ，洗板 5 次。
操作步驟
1. 從室溫平衡 20min 后的鋁箔袋中取出所需板條 ， 剩余板條用自封袋密封放回 4 ℃ 。
2. 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔 ， 標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn) 品 50 μ L ；
3. 樣本孔先加待測(cè)樣本 10 μ L ，再加* 40 μ L ；空白孔不加。
4. 除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（ HRP ）標(biāo)記的檢測(cè)抗體 100 μ L ，用封板膜封住反應(yīng)孔， 37 ℃ 水浴鍋或恒溫箱溫育 60min 。
5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置 1min ，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板 5 次（也可用洗板機(jī)洗板 ） 。
6. 每孔加入底物 A 、 B 各 50 μ L ， 37 ℃ 避光孵育 15min 。

7. 每孔加入終止液 50 μ L ， 15min 內(nèi) ， 在 450nm 波長(zhǎng)處測(cè)定各孔 的OD 值。
結(jié)果判斷
繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：在 Excel 工作表中，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，對(duì) 應(yīng)OD 值作縱坐標(biāo) ， 繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線 ， 按曲線方程計(jì)算各樣本濃度值。
試劑盒性能
1. 準(zhǔn)確性：標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù) R 值，大于等 于0.9900 。
2. 靈敏度：zui低檢測(cè)濃度小于 10 pmol/ L 。
3. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
4. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于 15% 。
5. 貯藏： 2-8 ℃ ，避光防潮保存。
6. 有效期： 6 個(gè)月
免責(zé)聲明
1. 試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實(shí)驗(yàn)或人體實(shí)驗(yàn)，否則所產(chǎn)生的一切后果，由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)，本公司概不負(fù)責(zé)。
2. 嚴(yán)格按照說明書操作，實(shí)驗(yàn)者違反說明書操作，后果由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)。