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細(xì)胞凋亡熒光檢測(cè)試劑盒（NucView 488 and MitoView 633 Apoptosis

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

該試劑盒包含兩種主要的染料NucViewTM 488 caspase-3 底物和MitoViewTM 633線粒體染料，可以非常方便的同時(shí)顯示細(xì)胞凋亡中Caspase-3的活力以及線粒體膜電位的變化。方法可以選擇流式細(xì)胞術(shù)或者熒光顯微鏡，兩種染料的光譜分離使得熒光的重疊現(xiàn)象降為Z小。

詳細(xì)介紹

該試劑盒包含兩種主要的染料NucView^TM 488 caspase-3 底物和MitoView^TM 633線粒體染料，可以非常方便的同時(shí)顯示細(xì)胞凋亡中Caspase-3的活力以及線粒體膜電位的變化。方法可以選擇流式細(xì)胞術(shù)或者熒光顯微鏡，兩種染料的光譜分離使得熒光的重疊現(xiàn)象降為zui小。

試劑盒原理：

Caspase家族在介導(dǎo)細(xì)胞凋亡的過(guò)程中起著非常重要的作用，其中caspase-3為關(guān)鍵的執(zhí)行分子，它在凋亡信號(hào)傳導(dǎo)的許多途徑中發(fā)揮功能。Caspase-3正常以酶原（32KD）的形式存在于胞漿中，在凋亡的早期階段，它被激活?；罨腃aspase-3能夠特異切割底物DEVD-NucView 488。根據(jù)這一特點(diǎn)，Biotium 將一段帶有大量負(fù)電荷的DEVD肽連接到一種能和DNA結(jié)合的染料上。底物本身不能產(chǎn)生熒光，但是這種底物可以快速的穿過(guò)細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)并在這里被活化的Caspase-3剪切，從而釋放出和DNA有高親和力的染料，釋放出來(lái)的染料遷移進(jìn)入細(xì)胞核并把細(xì)胞核染成亮綠色。根據(jù)釋放的熒光強(qiáng)度的大小，可以測(cè)定caspase-3的活性，從而反映Caspase-3被活化的程度。從這里我們可以得出：這個(gè)熒光底物不同于傳統(tǒng)的底物，它實(shí)現(xiàn)活細(xì)胞 Caspase-3 活性檢測(cè)的同時(shí)染色細(xì)胞核DNA，具有典型的雙功能性。

線粒體跨膜電位的降低是細(xì)胞凋亡早期的不可逆事件，引起一系列線粒體相關(guān)變化。MitoView^TM 633是一種遠(yuǎn)紅外線粒體熒光染料（一種親脂性陽(yáng)離子化合物），在正常細(xì)胞中依據(jù)線粒體膜電位（外正內(nèi)負(fù)）的存在，逐漸擴(kuò)散進(jìn)質(zhì)膜并沉積在線粒體內(nèi)，在激發(fā)光下放出熒光，可以非常方便地使用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡來(lái)觀察線粒體的形態(tài)和移動(dòng)的變化情形。例如下圖，活的Hela細(xì)胞用MitoView^TM 633染色結(jié)果

HeLa cells were stained with MitoView 633 for 30 min, rinsed in PBS, and fluorescence was visualized on an Olympus epifluorescence microscope using a Cy5 filter. Image is a representative live HeLa cell stained with MitoView 633.

但是，在開(kāi)始凋亡細(xì)胞中，線粒體膜電位的降低，MitoView^TM 633染料不會(huì)（或少量）進(jìn)入線粒體，這樣，開(kāi)始凋亡細(xì)胞相對(duì)于健康活細(xì)胞來(lái)說(shuō)，被MitoView^TM 633染色很少或者沒(méi)有，與caspase-3底物DEVD-NucView 488形成一種負(fù)相關(guān)的關(guān)系，如下圖所示：

Microscopy of Jurkat cells stained with NucViewTM 488 and MitoViewTM 633. Healthy cells are strongly stained with MitoView^TM 633 （red） while the apoptotic cell with fragmented nucleus is strongly stained with NucView^TM 488 （green）. There is an inverse correlation between these probes.

某種情況下，尋找NucView^TM 488 和MitoView^TM 633熒光染料合適的工作液濃度非常重要，有一些高濃度情況下，這些染料探針有可能對(duì)細(xì)胞的其他結(jié)構(gòu)進(jìn)行著色。

試劑盒內(nèi)容物：

1 vial （100 μL）; NucView^TM 488 Caspase-3 substrate, 200X in DMSO

1 vial （100 μL）; MitoView^TM 633 Mitochondrial Dye, 200X in DMSO

貨號(hào)	產(chǎn)品名稱(chēng)	規(guī)格
30062	NucView 488 and MitoView 633 Apoptosis Kit 細(xì)胞凋亡熒光檢測(cè)試劑盒	100次

其它細(xì)胞凋亡熒光檢測(cè)產(chǎn)品：

貨號(hào)

產(chǎn)品名稱(chēng)

規(guī)格

70055

MitoView 633

20 X 50ug

10400

NucView^TM 488 Caspase-3 Enzyme Substrate 1mM in 1X PBS

100 uL

30001

JC-1 mitochondrial membrane potential detection kit

100 assays

30008-1

Caspase-3 DEVD-R110 Fluorometric & Colorimetric Assay Kit （25 assays）

kit

30008-2

Caspase-3 DEVD-R110 Fluorometric & Colorimetric Assay Kit （100 assays）

kit

30009-1

Caspase-3 DEVD-R110 Fluorometric HTS Assay Kit

1 mL

30009-2

Caspase-3 DEVD-R110 Fluorometric HTS Assay Kit

10 mL

30009-3

Caspase-3 DEVD-R110 Fluorometric HTS Assay Kit

100 mL

30011-1

Caspase-8 IETD-R110 Fluorometric and Colorimetric Assay Kit

25 assays

30011-2

Caspase-8 IETD-R110 Fluorometric and Colorimetric Assay Kit

100 assays

30012-1

Caspase-8 IETD-R110 Fluorometric HTS Assay Kit

1 mL

30012-2

Caspase-8 IETD-R110 Fluorometric HTS Assay Kit

10 mL

30012-3

Caspase-8 IETD-R110 Fluorometric HTS Assay Kit

100 mL

30017

Apoptosis & Necrosis Quantification Kit

50 assays

30018

Apoptotic, Necrotic & Healthy Cells Quantification Kit

50 assays

30019

MCB Glutathione Detection Kit

100 assays

30029

NucView^TM 488 Caspase-3 Assay Kit for live cells

活細(xì)胞caspase-3熒光檢測(cè)試劑盒

100 – 500A

30030

NucView^TM 488 caspase-3 substrate and sulforhodamine 101-annexin V （also called Texas Red^TM-annexin V）dual apoptosis assay kit

雙凋亡檢測(cè)試劑盒

50 - 250 assays

30060

CF488A Annexin V and 7-AAD Apoptosis Kit

細(xì)胞凋亡熒光檢測(cè)試劑盒

100 assays

30061

CF488A Annexin V and PI Apoptosis Kit

細(xì)胞凋亡熒光檢測(cè)試劑盒

100 assays

70054

MitoView Green

20X50ug