檢查試管是否干燥、潔凈，若否，則將其洗凈并置于干燥箱內(nèi)120℃烘干。

1.標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

    取普通清潔試管7支，標(biāo)號(hào)，1號(hào)管為空白，2～7管用微量注射器分別加1.0mg/mL的牛血清白蛋白（即標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)）溶液10，20，40，60，80，100mL。各管均用0.015mol/L PBS緩沖液補(bǔ)充到100mL（即0.1mL），詳見(jiàn)表6-1。混勻待用。

表13-1標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

2.將待測(cè)蛋白配成合適濃度

    另取3支清潔試管，編號(hào)8、9、10，用微量注射器按表6-2操作，將待測(cè)蛋白配成系列濃度。

表13-2待測(cè)蛋白的稀釋

3.加入G250試劑

    各試管充分混勻后，用取樣器分別加入5.0mL考馬斯亮蘭G250試劑，每加完一管，立即混合（注意不要太劇烈，以免產(chǎn)生大量氣泡而難于消除）。

4.比色

    各管室溫靜置2～5min后，在分光光度計(jì)上測(cè)定595nm處的光吸收值A ₅₉₅ ，空白對(duì)照為第1號(hào)試管，標(biāo)準(zhǔn)和待測(cè)蛋白樣同時(shí)比色。

    注意：不可使用石英比色皿（因不易洗去染色），只能使用玻璃比色皿，使用后立即用少量95%的乙醇潤(rùn)洗，洗去顏色。

5.制作標(biāo)準(zhǔn)曲線

    以標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)濃度（mg/mL）為橫座標(biāo)、吸光度值A ₅₉₅ 為縱座標(biāo)作圖，即得到一條標(biāo)準(zhǔn)曲線。

6.根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算待測(cè)蛋白濃度

    在標(biāo)準(zhǔn)曲線上，根據(jù)測(cè)出的待測(cè)樣品的A ₅₉₅ 值，查出試管中蛋白質(zhì)濃度，再按照計(jì)算公式：

    計(jì)算出待測(cè)蛋白濃度。如樣品稀釋合理且操作得當(dāng)，待測(cè)蛋白的三個(gè)數(shù)值應(yīng)具有同一性，取其平均值作為待測(cè)蛋白濃度。如某一光吸收值落在標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍外，舍棄該點(diǎn)。

計(jì)算

結(jié)果：待測(cè)蛋白質(zhì)的濃度為：         mg/mL