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當(dāng)前位置:上海研拓生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>活性氧檢測試劑盒實驗原理
1. dcfh-da可稀釋于培養(yǎng)基或緩沖液中。血清或培養(yǎng)基顏色并不影響dcfh-da及細(xì)胞內(nèi)熒光產(chǎn)生,但可能會影響熒光顯微鏡觀察,干擾熒光分光光度計、熒光酶標(biāo)儀或流式細(xì)胞儀熒光測定??蓪?/span>dcfh-da稀釋于無酚紅培養(yǎng)基或適宜的緩沖液如pbs中。這依賴于使用何種熒光設(shè)備進(jìn)行測定。
2. 加入dcfh-da的時機(jī)或孵育時間,以zui終能順利檢測細(xì)胞內(nèi)活性氧為目的。藥物處理時間較短(<2小時)或預(yù)計ros效應(yīng)較弱,可先加或同時加入dcfh-da。反之,treat 刺激時間較長(>6 小時)或預(yù)計產(chǎn)生ros效應(yīng)較強(qiáng),可后加dcfh-da。
3. 活性氧供體含高純度12 mm h2o2。加入細(xì)胞后其本身即是一種活性氧,而且在代謝過程中可產(chǎn)生其它類型的活性氧,均可使dcfh-da氧化為dcf呈現(xiàn)強(qiáng)綠色熒光。因而,用戶可使用該試劑作為測試實驗系統(tǒng)或儀器的陽性試劑,以初步觀察細(xì)胞活性氧所產(chǎn)生的熒光的一般特征,并且也可以將該實際作為實驗的一個陽性對照。推薦該試劑的細(xì)胞工作濃度為20~100 μm或更低濃度,但超過200μm將產(chǎn)生細(xì)胞毒。如果用戶熟悉ros熒光或?qū)嶒灈]有必要采用陽性對照,可以不加該試劑。
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