一、實驗目的 
通過實驗，掌握空氣干燥法制片技術(shù)。 
二、實驗原理 
在骨髓細胞中，有絲分裂的指數(shù)是相當高的，因此可以直接得到中期細胞而不必像血淋巴細胞那樣要經(jīng)過體外培養(yǎng)。通過骨髓得到染色體是比較簡便的，一般也無需無菌操作。在臨床上多用于白血病的研究，在實驗條件下，這種染色體是機體內(nèi)真實情況的反映，而且用骨髓制片的方法易于觀察毒性物質(zhì)在體內(nèi)對細胞和染色體的影響。 
直接制片法，是直接從骨髓中取出細胞，經(jīng)壓片法或空氣干燥法制片。所謂空氣干燥法，實際上是將細胞經(jīng)過秋水仙素處理 ─ 低滲處理 ─ 充分的固定─ 滴片等步驟之后在載玻片上得到染色體制片的技術(shù)。有時，有人把滴片的步驟叫做染色體分散，也有人把這一步和隨后的干燥稱為空氣干燥法。“空氣干燥”就是滴片后，不加熱或任何處理，使載片在室溫下自然干燥的方法?？諝飧稍锓ㄊ且粋€十分有用的基本技術(shù)，要熟練掌握。 
三、實驗材料 
小白鼠 
四、實驗器具和藥品試劑 
冰箱、離心機、恒溫水浴鍋、顯微鏡、分析天平、藥物天平、試管架、離心管、吸管、燒杯、量筒、注射器(1ml、5ml)、5號針頭、載玻片、解剖盤、解剖刀、剪刀、鑷子、酒精燈、切片盒、切片架、紗布。 
秋水仙素、檸檬酸鈉、氯化鉀、冰醋酸、甲醇、磷酸緩沖液、Giemsa、甘油、 
硫酸、重鉻酸鉀。 
五、實驗方法和步驟 
(一) 秋水仙素處理 取骨髓前3～4小時先給小白鼠經(jīng)腹腔注入0. 1％的 
秋水仙素，注射劑量為4毫克／每公斤動物體重。 
(二) 取骨髓 經(jīng)秋水仙素處理的小白鼠，可用損傷脊髓法處死，然后用剪刀剪開大腿上的皮膚和肌肉，取出大腿骨和脛骨，用一小塊紗布來回搓干凈附在骨上的肌肉碎渣。剪掉股骨兩端膨大的關(guān)節(jié)頭，然后將股骨剪碎投入小燒杯中，用2毫升1％檸檬酸鈉溶液攪爛碎骨，使骨髓細胞游離出來。靜止片刻，用吸管把懸浮液吸到離心管中，可重復沖洗一次。此時離心管中的細胞懸浮液可達 4～5毫升。 
(三) 低滲 將所獲得的細胞懸浮液行平衡(注意：每次離心前都要平衡)，然后以 1000rpm離心10分鐘，吸去上清液，留0.2ml沉淀物，加0.075M KCL 溶液至8 毫升刻度，將細胞沉淀物吹散打勻，在水浴37℃ 低滲20～30分鐘。 
(四) 固定 低滲處理后的材料，以1000rpm離心10分鐘，吸去上清液，留0.2ml沉淀物，用吸管吹散沉淀物，沿管壁加固定液至6毫升, 沖勻后靜止固定20分鐘，即*次固定。按上述條件離心，去上清液，再次加入固定液至6ml，進行第二次固定。20分鐘后離心吸去上清液，留0.2ml沉淀物,再往沉淀物中滴加4滴固定液，沖勻制成細胞懸液。 
(五) 滴片 取事先在冰箱中預冷的載玻片(載玻片須經(jīng)硫酸洗液浸泡10天以上，經(jīng)清水沖洗，用蒸餾水浸泡)，滴2～3滴細胞懸液于粘有冰水的載玻片上，用嘴吹氣，使細胞迅速分散。將載片插放在切片架上晾干。 
(六) 染色 取2張制片平放在玻璃板上，用10：1 Giemsa染液染色20分鐘，流水沖洗后晾干即可鏡檢。 
(七) 觀察 用中倍鏡選擇分散適度，不重迭的染色體分裂相，轉(zhuǎn)高倍鏡詳細觀察小白鼠染色體的形態(tài)特征，并計算2n的染色體數(shù)目。