禽流感實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)方案

一、實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)設(shè)置
實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)由中國(guó)疾病預(yù)防控制中心病毒病預(yù)防控制所國(guó)家流感中心和省級(jí)流感實(shí)驗(yàn)室兩級(jí)組成。
二、實(shí)驗(yàn)室條件及生物安全操作的要求
1．省級(jí)流感實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)條件及生物安全的操作要求
（1）實(shí)驗(yàn)生物安全要求：安全Ⅱ級(jí)+（BSL-2 級(jí)+）或安全Ⅲ級(jí)（BSL-3 級(jí)）。
（2）特異性H5 的 RT-PCR 病毒核酸檢測(cè)、血清學(xué)檢測(cè)中用到的血凝抑制實(shí)驗(yàn)（HI）可以在安全Ⅱ級(jí)+（BSL-2 級(jí)+）實(shí)驗(yàn)室里操作。
（3）特異性H5 的 RT-PCR 病毒核酸檢測(cè)在安全Ⅱ級(jí)+（BSL-2級(jí)+）實(shí)驗(yàn)室的生物安全柜里提取病毒的核酸，進(jìn)行病毒核酸檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)室要求請(qǐng)參照國(guó)家有關(guān)核酸檢測(cè)要求的規(guī)定。
（4）微量中和實(shí)驗(yàn)、特異性H5 的 RT-PCR 病毒核酸檢測(cè)陽(yáng)性的采樣標(biāo)本的病毒分離、尸檢標(biāo)本的檢測(cè)必須在安全Ⅲ級(jí)（BSL-3 級(jí)）實(shí)驗(yàn)室里操作。
（5）省級(jí)流感實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)條件：具備進(jìn)行禽流感相關(guān)臨床標(biāo)本初篩所需的生物安全柜、離心機(jī)、PCR 儀、電泳儀、紫外線檢測(cè)儀等配套設(shè)備。
2．國(guó)家流感中心
實(shí)驗(yàn)生物安全要求：生物安全Ⅱ級(jí)+（BSL-2 級(jí)+）和生物安全Ⅲ級(jí)（BSL-3 級(jí)）實(shí)驗(yàn)室。
3．省級(jí)流感實(shí)驗(yàn)室職責(zé)
（1）禽流感采樣標(biāo)本的臨床標(biāo)本特異性H5 的 RT-PCR 病毒核酸檢測(cè)；
（2）禽流感H5 的血清學(xué)檢測(cè)工作;
（3）特異性H5 的 RT-PCR 病毒核酸檢測(cè)陽(yáng)性標(biāo)本的病毒分離必須在生物安全Ⅲ級(jí)（BSL-3 級(jí)）實(shí)驗(yàn)室；
（4）沒(méi)有生物安全Ⅲ級(jí)（BSL-3 級(jí)）實(shí)驗(yàn)室的，將標(biāo)本送國(guó)家流感中心做病毒的分離工作。
4．國(guó)家流感中心實(shí)驗(yàn)室職責(zé)
（1）國(guó)家流感中心設(shè)立在中國(guó)疾病預(yù)防控制中心病毒病預(yù)防控制所流感室；
（2）對(duì)各省報(bào)告的禽流感疑似病例或確診病例進(jìn)行復(fù)核、確認(rèn)；
（3）對(duì)不具備禽流感病毒分離條件的省份送檢標(biāo)本的檢測(cè)、分離和確認(rèn)；
（4）對(duì)需要做微量中和實(shí)驗(yàn)的血清標(biāo)本進(jìn)行微量中和試驗(yàn)；
（5）對(duì)各省級(jí)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)人員的培訓(xùn)；
（6）對(duì)各省級(jí)流感實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量控制。
三、原始標(biāo)本采集
1．標(biāo)本采集人員
醫(yī)療機(jī)構(gòu)的醫(yī)生、護(hù)士或當(dāng)?shù)丶膊☆A(yù)防控制中心專(zhuān)業(yè)人員負(fù)責(zé)標(biāo)本采集并填寫(xiě)標(biāo)本登記表，標(biāo)本采集人員按照《禽流感職業(yè)暴露人員防護(hù)原則》做好個(gè)人防護(hù)。
2．標(biāo)本采集種類(lèi)和時(shí)限
（1）采集標(biāo)本的種類(lèi)：疑似禽流感患者的咽、*或含漱液、血清以及死亡病例的尸檢肺組織、氣管分泌物。
（2） 采集標(biāo)本時(shí)間：
1）咽、*或含漱液在發(fā)病的頭3 天采集；
2）急性期血清在發(fā)病后7 天內(nèi)采集，恢復(fù)期血清在發(fā)病后2-4周采集；
3）尸檢標(biāo)本尸檢時(shí)采集。
3．標(biāo)本的運(yùn)送：所有采集的標(biāo)本應(yīng)在醫(yī)院采集時(shí)立即分裝，一式二份，其中一份單獨(dú)保存，以備復(fù)核。采集的標(biāo)本若不能在24 小時(shí)內(nèi)送達(dá)，則應(yīng)盡快在－70 ℃以下保存。無(wú)－70 ℃條件的需在－20℃冰箱短時(shí)間暫存，并盡快遞送標(biāo)本。
4．標(biāo)本采集的方法：詳見(jiàn)國(guó)標(biāo)《流行性感冒診斷標(biāo)準(zhǔn)及處理原則》
四、送流感中心的標(biāo)本包裝、運(yùn)送與接收
1．標(biāo)本的包裝
（1）標(biāo)本必須放在大小適合的帶螺旋蓋內(nèi)有橡膠圈的塑料管里，擰緊。
（2）將密閉后的標(biāo)本放入大小適合的塑料袋內(nèi)密封；每袋裝一份標(biāo)本。
（3）直接在塑料管上用油性記號(hào)筆寫(xiě)明樣本的種類(lèi)、采樣時(shí)間、編號(hào)、姓名，同時(shí)也將標(biāo)本有關(guān)信息填在禽流感人體標(biāo)本送檢登記表，連同塑料管用另一塑料袋內(nèi)密封。
（4）將裝標(biāo)本的密封袋放入運(yùn)輸箱內(nèi)（或疫苗冷藏包），放入冰排，然后以柔軟物質(zhì)填充，內(nèi)襯具吸水和緩沖能力的材料。同一患者2 份以上的密封標(biāo)本，可以放在同一個(gè)塑料袋內(nèi)再次做密封。若將進(jìn)行病毒分離，可將密封好的裝有標(biāo)本的容器直接放入液氮運(yùn)輸罐內(nèi)運(yùn)輸。所有容器必須印有生物危險(xiǎn)標(biāo)識(shí)。
2．標(biāo)本運(yùn)送
（1）航空或鐵路運(yùn)送。
（2）專(zhuān)人專(zhuān)車(chē)運(yùn)送：主要用于近距離樣品運(yùn)送。
3．標(biāo)本的接收
（1）各省級(jí)中心實(shí)驗(yàn)室應(yīng)公布標(biāo)本接收，并實(shí)行24 小時(shí)標(biāo)本接收制；
（2）國(guó)家實(shí)驗(yàn)室標(biāo)本接收：
需送國(guó)家流感中心實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的原始標(biāo)本、病毒分離物、可疑陽(yáng)性標(biāo)本、血清等，填寫(xiě)標(biāo)本送檢登記表，在低溫保存條件下，于24小時(shí)內(nèi)送至中國(guó)疾病預(yù)防控制中心病毒病預(yù)防控制所流感中心進(jìn)行復(fù)核。國(guó)家流感中心標(biāo)本接收為：中國(guó)疾病預(yù)防控制中心病毒病預(yù)防控制所，地址：北京市宣武區(qū)迎新街100 號(hào)，：郭元吉、王敏，：，，（010）
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