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ELISA試劑盒的類型
ELISA可用于測定抗原,也可用于測定抗體。在這種測定方法中有三個必要的試劑:
(1)固相的抗菌素原或抗體,即"免疫吸附劑";
(2)酶標記的抗原或抗體,稱為"結(jié)合物";
(3)酶反應(yīng)的底物。
根據(jù)試劑的來源和標本的情況以及檢測的具體條件,可設(shè)計出各種不同類型的檢測方法。用特異性抗原進行包被和制備酶結(jié)合物,以檢測相應(yīng)的抗體。與間接法測抗體的不同之處為以酶標抗原代替酶標抗抗體。此法中受檢標本不需稀釋,可直接用于測定,因此其敏感度相對高于間接法。乙肝標志物中抗HBs的檢測常采用本法。本法關(guān)鍵在于酶標抗原的制備,應(yīng)根據(jù)抗原結(jié)構(gòu)的不同,尋找合適的標記方法。
大鼠NADPHelisa試劑盒操作步驟如下:
1)將特異性抗原與固相載體聯(lián)結(jié),形成固相抗原。洗滌除去未結(jié)合的抗原及雜質(zhì)。
2)加稀釋的受檢血清,保溫反應(yīng)。血清中的特異抗體與固相抗原結(jié)合,形成固相抗原抗體復(fù)合物。經(jīng)洗滌后,固相載體上只留下特異性抗體,血清中的其他成份在洗滌過程中被洗去。
3)加酶標抗抗體??捎妹笜丝谷薎g以檢測總抗體,但一般多用酶標抗人IgG檢測IgG抗體。固相免疫復(fù)合物中的抗體與酶標抗體抗體結(jié)合,從而間接地標記上酶。洗滌后,固相載體上的酶量與標本中受檢抗體的量正相關(guān)。
4)加底物顯色
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