產(chǎn)品名稱：人GTP酶活化蛋白(GAP)ELISA  試劑盒

：135 64515386    

產(chǎn)品規(guī)格：48T/96T

ELISA試劑盒說明書

Elisa試驗(yàn)在實(shí)驗(yàn)室中比較常見，那么elisa實(shí)驗(yàn)具體步驟怎么做，有沒有比較詳細(xì)的elisa試劑盒說明書

  Elisa試劑盒說明書如下：

  ELISA試劑盒說明書1:用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法: 

  1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10靏／ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃ 過夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。（簡稱洗滌，下同）。

  2.加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃ 孵育1小時(shí)。然后洗滌。（同時(shí)做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔）。

  3.加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小時(shí)，洗滌。

  4.加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。   5.終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。

  6.結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號(hào)表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。   ELISA試劑盒說明書二：用于檢測未知抗體的間接法：

  1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10靏／ml，每孔加0.1ml，4℃過夜。次日洗滌3次。   2.加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌。（同時(shí)做空白、陰性及陽性孔對照）

  3.于反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體（抗抗體）0.1ml，37℃孵育30-60分鐘，洗滌,zui后一遍用DDW洗滌。

  4.于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘   5.于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml 

  6.可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號(hào)表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。

  ELISA 是一種敏感性高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)診斷方法，由于其試劑穩(wěn)定、易保存、操作簡便、結(jié)果判斷較客觀等因素，以及既適宜于大規(guī)模篩查試驗(yàn)又可以用于少量標(biāo)本的檢測，既可以做定性試驗(yàn)也可以做定量分析等優(yōu)點(diǎn)，已廣泛應(yīng)用于微生物學(xué)、寄生蟲學(xué)、腫瘤學(xué)和細(xì)胞因子等領(lǐng)域

人凋亡相關(guān)因子(FAS/CD95)ELISA試劑盒間接法簡單操作步驟：

　?。?/span>1）、將特異性抗原與固相載體聯(lián)結(jié)，形成固相抗原；

　　（2）、加稀釋的受檢血清，保溫反應(yīng)。血清中的特異抗體與固相抗原結(jié)合，形成固相抗原抗-體復(fù)合物；

　　（3）、加酶標(biāo)抗抗體；

　?。?/span>4）、加入酶促反應(yīng)底物，發(fā)生顯色反應(yīng)，顯色的深淺與待測抗體的量成正比。

ELISA試劑盒操作技術(shù)相關(guān)的注意事項(xiàng)：

•  (FAS/CD95)ELISA試劑盒說明書進(jìn)行操作。操作前將試劑在室溫下平衡30～60min。

　　⑵ 加樣后及時(shí)放人孵箱。標(biāo)本較多時(shí)，要分批操作。按說明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間，防止孵育時(shí)間人為延長，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗*。

　　(3)封板溫育時(shí)，各孔一定要封嚴(yán)，防止陽性標(biāo)本的液體蒸發(fā)，產(chǎn)生周邊現(xiàn)象從而導(dǎo)致“花板”的出現(xiàn)。

　　(4)用洗板機(jī)洗板時(shí)，保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干：還要防止針口有纖維蛋白或異物，這些異物在洗板的過程中易產(chǎn)生拖帶現(xiàn)象而導(dǎo)致“花板”的出現(xiàn)。

　　(5)合理安排檢測量，以免反應(yīng)板過多造成洗板等待時(shí)間長。

　　(6)加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。

　　(7)顯色劑盡量在臨用前配制，堅(jiān)持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用。

　　(8)加樣時(shí)保持顯色劑不外流;A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。

    (9)應(yīng)保證C清潔，整個(gè)操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸。以上的措施可以使“花板”降至限度。從而提高檢測的特異性。并得到更準(zhǔn)確、可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

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    人GTP酶活化蛋白(GAP)ELISA  試劑盒所生產(chǎn)銷售的各種ELISA試劑盒均采用的是定量夾心酶聯(lián)免疫技術(shù)?？贵w具體為FGF6已經(jīng)被預(yù)先涂到微孔板。標(biāo)準(zhǔn)和樣品吸入井和任何FGF6目前被綁定的固定化抗體。*共軛的抗體特異性FGF6除去任何未結(jié)合的物質(zhì)后，加入到孔中。抗*蛋白共軛的辣根過氧化物酶（HRP）的洗滌后，加入到孔中。經(jīng)過洗滌，以除去任何未結(jié)合的抗*蛋白的酶試劑，底物溶液加入到孔中，顯色成比例的量的初始步驟中的約束的FGF6。彩色顯影被停止并測量的顏色的強(qiáng)度。

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人GTP酶活化蛋白(GAP)ELISA  試劑盒如何鑒別不正規(guī)偽劣ELISA試劑盒

隨著生命科學(xué)技術(shù)的高速發(fā)展，生物公司如雨后春筍一般紛紛涌現(xiàn)，各類生物試劑產(chǎn)品大大方便了科研工作者的工作。無疑，健康有序的生物試劑產(chǎn)業(yè)環(huán)境和秩序?qū)τ谡麄€(gè)行業(yè)的健康發(fā)展有著舉足輕重的作用。然而，近來許多客戶向我們反映一些唯利是圖的公司和小作坊，用不正規(guī)偽劣的ELISA試劑盒坑害廣大的科研工作者，他們往往唯利是圖，無視科學(xué)研究的嚴(yán)謹(jǐn)性和嚴(yán)肅性，讓廣大的科研工作者被動(dòng)造假，嚴(yán)重?cái)_亂了科研工作，嚴(yán)重?cái)_亂了市場秩序，所以我們有義務(wù)，有責(zé)任揭露這些作偽造假者制作不正規(guī)偽劣ELISA試劑盒的手法，同時(shí)提供如何鑒別這些不正規(guī)偽劣ELISA試劑盒的方法，供廣大的科研工作者和用戶參考，讓那些掛羊頭賣狗肉，冒牌進(jìn)口試劑，以及全無誠信，作假造偽者，如過街之鼠，人人喊打。

造假一：在國外注冊公司，國內(nèi)生產(chǎn)，隱瞞生產(chǎn)產(chǎn)地，明明是國產(chǎn)試劑卻宣稱國外進(jìn)口虛報(bào)高價(jià)，欺騙廣大用戶。

鑒別方法：將“廠家名”、“ELISA”和“假貨”關(guān)鍵詞在google上搜索，各類論壇的用戶會(huì)將該ELISA試劑盒的質(zhì)量和效果，是否偽劣一一有所討論。 造假二：仿冒進(jìn)口ELISA試劑盒，使得進(jìn)口分裝ELISA質(zhì)量參差不齊，魚龍混雜，很多都是經(jīng)小作坊粗劣加工而成，這樣的試劑盒偶爾可以僥幸做出結(jié)果，如果做不出來，所購買的公司又沒有完善的售后服務(wù)，往往對客戶的問題推三阻四，推脫責(zé)任，zui后還是消費(fèi)者吃虧。

鑒別方法：直接打給生產(chǎn)廠商，詢問他們試劑盒抗原和抗體的來源，索要試劑盒說明書，然后利用網(wǎng)絡(luò)確認(rèn)這些信息，正規(guī)的ELISA生產(chǎn)商，這些信息都是非常齊全，如果信息不全，則該ELISA的制造水平和質(zhì)量都會(huì)很差。  造假三：某些不正規(guī)廠家為了夸大其生產(chǎn)ELISA涵蓋的指標(biāo)的范圍，用一種指標(biāo)來冒充其它指標(biāo)，造成各種種屬、各種指標(biāo)都可以做的假象。比如用TGFβ這樣的指標(biāo)代替大多數(shù)試劑盒的其他指標(biāo)作為檢測抗體，同樣可以獲得良好的標(biāo)準(zhǔn)曲線。因?yàn)?/span>TGFβ在大多數(shù)哺乳類動(dòng)物中（人、大鼠、小鼠、豬、牛„„）都有廣泛表達(dá)，種屬間抗原的氨基酸序列同源性達(dá)*，TGFβ隨著其他因子的影響，其表達(dá)水平也會(huì)發(fā)生相應(yīng)的變化，一般客戶很難察覺，因此這樣的惡性造假行為使得消費(fèi)者被動(dòng)造假，后果極其嚴(yán)重，因此善意提醒客戶警惕此類作假試劑