淀粉分支酶(SBE)檢測試劑盒
需自備的的儀器和用品
可見分光光度計、水浴鍋、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽、冰、蒸餾水
試劑的組成和配制
提取液：液體60mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：液體20mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×2支，4℃保存；臨用前每支加入1mL雙蒸水，充分溶解后備用；
試劑三：液體25mL×1瓶，4℃保存；
試劑四：液體5mL×1瓶，4℃保存；
粗酶液提取
稱取約0.1g組織加入1mL提取液，冰浴中勻漿。15000g ，4℃離心15min，取上清，置冰上待測。
測定步驟
試劑名稱（μL） | 對照管 | 測定管 |
煮沸1min后滅活的粗酶液 | 250 |
|
粗酶液 |
| 250 |
試劑一 | 320 | 320 |
試劑二 | 30 | 30 |
混勻，37℃準(zhǔn)確保溫20 min，置沸水浴中1 min終止反應(yīng)（蓋緊防止水分散失），冷卻
試劑三 | 500 | 500 |
試劑四 | 40 | 40 |
混勻，室溫靜置10min，用蒸餾水調(diào)零，660nm處讀取各管吸光值。
注意：
1、可以在不同對照管中加入不同樣品的粗酶液，然后集中進(jìn)行1min沸水浴處理。
2、試劑一如有沉淀，加入之前要使之充分溶解混勻。
SBE活力單位的計算
方法（一）按照蛋白濃度計算
單位的定義：以波長660nm的吸光度下降百分率表示，每mg蛋白在反應(yīng)體系中每降低1％dian藍(lán)值為一個酶活性單位。
- 活性（U/mg prot）=（A對照管-A測定管）/A對照管÷蛋白濃度(mg/mL) ×100
方法（二）按照樣本鮮重計算
單位的定義：以波長660nm的吸光度下降百分率表示，每g組織在反應(yīng)體系中每降低1％dian藍(lán)值為一個酶活性單位。
SBE活性（U/g 鮮重）=（A對照管-A測定管）/A對照管÷樣本鮮重(g/mL) ×100
淀粉分支酶(SBE)檢測試劑盒
