特別提醒：本產(chǎn)品僅供科研研究使用，不得用于人體臨床直接檢測(cè)。
產(chǎn)品名稱：γ谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(γGT)測(cè)試盒可見分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格：50管/48樣
檢測(cè)方法：可見分光光度法
產(chǎn)品貨號(hào)：BK-01S6386
產(chǎn)品分類：
商品介紹：
測(cè)定意義: γ-GT是γ-谷氨酰循環(huán)中的關(guān)鍵酶，催化GSH降解。γ-GT催化GSH或者其他γ-谷氨酰基化合物上的γ-谷氨?；D(zhuǎn)移到受體。也可以催化GSH和其他γ-谷氨?；衔锏乃?，產(chǎn)生谷鹽，在細(xì)胞外新陳代謝中起了重要的作用。 測(cè)定原理： γ-GT催化谷氨酰對(duì)硝基苯胺中γ-谷氨酰基轉(zhuǎn)移給N-甘氨酰甘，生成對(duì)硝基苯胺，在405nm有特征光吸收；通過測(cè)定405nm光吸收增加速率，來計(jì)算γ-GT酶活性。 自備儀器和用品： 低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)節(jié)移液器、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96孔板、和蒸餾水 |
所需的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶（SOD）的測(cè)定：
建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí)驗(yàn)
樣本和試劑浪費(fèi)！
1、樣本制備
① 組織樣本： 取約 0.1g 組織（水分充足的樣本可取 0.25g），加入 1mL 提取液，在 4oC 或冰浴進(jìn)行 勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min，取上清作為待測(cè)液。 【注】：若增加樣本量，可按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進(jìn)行提取
| ② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本： 先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；取約 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）； 12000rpm 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。 【注】：若增加樣本量，可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量（10 4）：提取液（mL）為 500~1000：1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本：直接檢測(cè)；若渾濁，離心后取上清檢測(cè)。 |
實(shí)驗(yàn)方法學(xué)：
一、肝素的配制：
市售肝素凍干粉140單位/mg，1克瓶裝，每瓶140，000單位，稱取0.1克肝素凍干粉，加生理鹽水5ml，配成2800單位/ml。取50～100μl濕潤(rùn)管壁，可抗凝人血3～5ml，血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固，所以最好更濃一些。可以取0.1克肝素凍干粉，加3ml生理鹽水溶解后，取50～100μl,可抗凝鼠血2～4ml。
肝素抗凝管的制備：取0.1克肝素凍干粉，加2.5ml生理鹽水。取100μl～150μl滴入塑料或玻璃管中，濕潤(rùn)管壁，低于80℃小烤箱中（可以用烤面包的小烤箱），橫向轉(zhuǎn)動(dòng)，每隔5～10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次，直至干燥后放入4℃保存，可使2～5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集：
全血根據(jù)收集的條件，分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí)，不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清；抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1～2小時(shí)，直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血，輕輕顛倒充分抗凝后，可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征，選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。
選擇抗凝的注意點(diǎn)：
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致，同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒，充分抗凝，防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多（1ml抗凝全血能分離出0.4～0.5ml血漿）;
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后，解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁，如有則需要離心去掉渾濁后
用于測(cè)定。
50次 分枝桿菌RNAout
2 ug pCMV5-300 pCMV5-300 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
檢定培養(yǎng)基 Test Medium 250g
100mg Poly r(A) Poly r(A) -20℃保存
500mL Phosphate Buffer，0.2M, pH7.6 Phosphate Buffer，0.2M, pH7.6 常溫保存
5nmol 接頭DNA（BamH I(Bgl II)-Sma I接頭） Adaptors -20℃保存
2 ug pMW29 pMW29 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
knudson C 培養(yǎng)基 knudson C Medium 250g
1瓶 SW480細(xì)胞株 SW480 低溫運(yùn)輸和保存
WS瓊脂 WS Salmonella Agar 250g
25g 乙烯利 Ethrel 4℃保存
γ谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(γGT)測(cè)試盒可見分光光度法AKT2 蛋白激B2 規(guī)格: 0.1ml
phospho-FRS2(Tyr436) 磷酸化成纖維細(xì)胞生因子受體底物2抗體 規(guī)格: 0.1ml
Syndecan 2/heparin sulphate protoglycans 1 硫酸肝素糖蛋白1抗體抗體 規(guī)格: 0.2ml
NFEM5/IRF4/MUM1 淋巴細(xì)胞特異性干擾素調(diào)節(jié)因子抗體 規(guī)格: 0.2mlEpigen 上皮細(xì)胞有絲分裂蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
CKMT/Creatine kinase MT 酸性型線粒體肌酸激抗體 規(guī)格: 0.2mlRabbit Anti-Goat IgG/AP 堿性磷酸（AP）標(biāo)記的兔抗羊IgG 規(guī)格: 0.1ml
Rabbit anti-MG IgG/PE-CY5 PE-CY5標(biāo)記的兔抗爪沙鼠IgG 規(guī)格: 0.1mlCCDC90A 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白90A抗體 規(guī)格: 0.2ml
KAT3B/Ep300 轉(zhuǎn)錄接蛋白EP300抗體 規(guī)格: 0.2mlCCDC124 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白124抗體 規(guī)格: 0.2ml
Collagen V Ⅴ型膠原抗體 規(guī)格: 0.1mlBCAS2 相關(guān)蛋白2抗體 規(guī)格: 0.1ml
Rabbit Anti-Goat IgG/Gold 膠體金標(biāo)記的兔抗羊IgG 規(guī)格: 0.5mlADRA1/ADRA1B/alpha 1 Adrenergic Receptor alpha 1上素能受體抗體 規(guī)格: 0.1ml
Phospho-HSP27 (Ser254) 磷酸化熱休克蛋白27抗體 規(guī)格: 0.1mlNCE2 泛素結(jié)合E2F抗體 規(guī)格: 0.2ml
γ-Catenin γ-連環(huán)素/連接蛋白γ抗體 規(guī)格: 0.2mlIGFR3/CD16 FC段γ受體3/免疫球蛋白G Fc段受體III抗體 規(guī)格: 0.1ml
Salmonella enteritidis/SE 腸沙門氏菌抗體 0.2mlTHRA1+2 甲狀激素受體α1+α2抗體 規(guī)格: 0.2ml
注意事項(xiàng)：
1、試劑二為酶，不可冷凍，使用時(shí)在冰上放置。
2、對(duì)照管只需要做一管。
3、若對(duì)照管吸光值大于2，建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用（10μl試劑二原液+60μl蒸餾水）。
4、SOD為什么有的樣本測(cè)定管大于對(duì)照管，對(duì)照管數(shù)值在什么范圍？
對(duì)照管的范圍是0.8-2。對(duì)照管吸光值過低可能是（1）試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用；（2)沒有按順序加試劑；（3）反應(yīng)時(shí)間不夠，可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間（反應(yīng)時(shí)間30min可以延長(zhǎng)到40min）。對(duì)照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測(cè)定管大于對(duì)照管，可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大，為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測(cè)，通常可以使測(cè)定正常。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
