ReadiUse 6色 人 TBNK抗體試劑盒利用干燥的多色珠子通過流式細(xì)胞術(shù)鑒定淋巴細(xì)胞亞群、CD4+ T 細(xì)胞、CD8+ T 細(xì)胞、B 細(xì)胞和 NK 細(xì)胞。 該試劑含有針對(duì)人 CD3、CD4、CD8、CD16、C19、CD45 和 CD56 的熒光標(biāo)記抗體。 該試劑盒旨在以“裂解/免洗”形式用于分析人類全血。 還包括用于識(shí)別死細(xì)胞的活性染料和用于確定淋巴細(xì)胞亞群細(xì)胞濃度的熒光計(jì)數(shù)珠的數(shù)量。百螢生物為您提供優(yōu)質(zhì)的ReadiUse 6色 人 TBNK抗體試劑盒。
操作方案
概述
儀器
ReadiUse 6-Color Human TBNK Antibody Kit 設(shè)計(jì)用于配備適當(dāng)計(jì)算機(jī)硬件和軟件的流式細(xì)胞儀。 流式細(xì)胞儀必須配備：
1.488 nm 藍(lán)色激光和 635 nm 紅色激光
2.能夠檢測(cè)光散射（正面和側(cè)面）
3.488nm 激光激發(fā)時(shí)的四色熒光通道：FITC、PE、PerCP-Cy5.5 和 PE-Cy7
4.635nm 激光激發(fā)時(shí)的雙色熒光通道：APC 和 APC-Cy7
5.可選：405nm 紫激光，配備 455nm 檢測(cè)通道
規(guī)格
| 激發(fā)光 | 發(fā)射光線 | 綴合反應(yīng) | 推薦通道 (例如: Cytek Aurora) |
| Blue | 520 nm | CD3 (SK7) - iFluor™ 488 | B2 (518-529 nm) |
| Blue | 575 nm | CD16 (3G8) - PE, CD56 (MY31) - PE | B4 (560-583 nm) |
| Blue | 700 nm | CD45 (2D1) - PerCP-iFluor™ 680 | B9 (688-707 nm) |
| Blue | 780 nm | CD4 (SK3) - PE-iFluor™ 750 | B13 (772-795 nm) |
| Red | 665 nm | CD19 (SJ25C1) - APC | R1 (652-669 nm) |
| Red | 780 nm | CD8 (SK1) - APC-iFluor™ 750 | R7 (772-795 nm) |
| Violet | 455 nm | NucPO-1 | V3 (451-466 nm) |
防范措施
1.該試劑含有疊dan化鈉。 吞食疊dan化鈉是有害的 (R22)。 如果吞食，請(qǐng)立即就醫(yī)。 與酸接觸會(huì)釋放有毒氣體。 疊氮化物在處理過程中應(yīng)用大量水沖洗，以避免鉛或銅管道中的沉積物。
2.10X Lyse/Fix Buffer（組分 B）含有甲醛。 甲醛有毒，避免吸入或接觸。
3.所有血液樣本都被視為生物危害品。請(qǐng)按照當(dāng)?shù)叵嚓P(guān)規(guī)定處理。
工作溶液的配制
1X 裂解/修復(fù)緩沖液
通過向 10X 裂解/固定緩沖液瓶（組分 B）中加入 3.0 mL 去離子水來制備 1X 裂解/固定緩沖液。 將瓶子混合并重新標(biāo)記為 1X Lysis/Fix Buffer。
樣品制備
1.制備血細(xì)胞樣本，可以使用在 EDTA 管中收集的新鮮血液或濃度不超過 106 個(gè)細(xì)胞/mL 的分離 PBMC。
2.從袋中取出所需數(shù)量的試劑管并重新密封袋。
3.全部混合樣品并將 50 μL 的樣品準(zhǔn)確分配到試劑管中。注意樣品分配的準(zhǔn)確性將影響確定的細(xì)胞濃度的準(zhǔn)確性。
4.輕輕渦旋每個(gè)管 30 秒，以確保干燥的試劑全部溶解。
5.在室溫下孵育 20 分鐘。保護(hù)管免受直射光。
6.在每個(gè)試管中加入 450 µL 1X Lysis/Fix Buffer 并渦旋 10 秒。將試管避光至少 15 分鐘。
7.以低速渦旋樣品管并加載到細(xì)胞儀上進(jìn)行分析。 該抗體試劑盒，設(shè)計(jì)用于裂解/免洗形式。如果在分析前清洗樣品，將失去確定細(xì)胞濃度的能力。
8.流式細(xì)胞儀采集：根據(jù)制造商的說明啟動(dòng)和操作流式細(xì)胞儀。使用適當(dāng)?shù)募?xì)胞儀專用軟件分析數(shù)據(jù)。
