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魚孕激素/孕酮ELISA試劑盒OD值的范圍
    在ELISAzui后步驟中OD值的范圍也是有一定講究的，不容小覷。說到OD值范圍，我公司業(yè)務(wù)員在售后問題的處理過程中也常會(huì)有客戶咨詢其范圍是多少。其實(shí)是不一定的，我們以AβELISA為例，2以上就會(huì)偏飽和，變化不容易做出來，所以一般把model組控制在0.8-1.5，而control組的話基本跟空白差不多，不到0.1。
    所以，一般情況下我們會(huì)建議先做個(gè)標(biāo)曲以及樣品的梯度稀釋，然后選擇在標(biāo)曲中間位置的樣品稀釋度作為以后的參照稀釋度。
    同時(shí)，也與使用的detector有關(guān)，detector有自己的檢測范圍和線性范圍。如果實(shí)驗(yàn)室使用的儀器，說明書上說檢測范圍是0~4，線性范圍是0~3，但我們自己的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示的線性范圍是0~2OD。如果只檢測空白的沒有經(jīng)過處理的Elisa孔，大致在0左右。

魚孕激素/孕酮ELISA試劑盒問題解析
    設(shè)計(jì)ELISA復(fù)孔檢查時(shí)，是對(duì)同一個(gè)樣品作兩次稀釋，再分別加到板上的兩個(gè)孔，還是只稀釋一次，然后吸取兩次分別加到兩個(gè)孔？前者似乎把稀釋時(shí)的誤差也考慮到了，但做出來的結(jié)果兩個(gè)孔相關(guān)挺大的。而較常使用的是哪種稀釋方法？
    為了減小誤差，是先稀釋再加樣。而針對(duì)這位客戶所遇到的疑問，我公司技術(shù)人員是這樣解說的：
    1. 前者測的是稀釋和移液的誤差，后者只有移液誤差。
    2. 一般都是稀釋一次，分兩孔吧。同濃度的分復(fù)孔。
    3. 由于是從同一原液稀釋，一般不考慮稀釋誤差(稀釋誤差是存在的)，都是稀釋到想要的倍數(shù)直接分孔(而不是一一稀釋，這樣可以使稀釋誤差減小)。
    4. 復(fù)孔是為了排除移液體積，板的影響，以及其他系統(tǒng)誤差的，要求復(fù)孔的濃度是*的。稀釋后分孔能滿足此要求，一一稀釋不能。

說明：
1．檢測原理：采用雙抗體夾心ABC-ELISA法
2．試劑盒保存：-20℃(較長時(shí)間不用時(shí))；2-8℃(頻繁使用時(shí))。
3．濃洗滌液低溫保存會(huì)有鹽析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶。
4．中、英文說明書可能會(huì)有不*之處，請(qǐng)以英文說明書為準(zhǔn)。
5．剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會(huì)含有少許水樣物質(zhì)，此為正常現(xiàn)象，不會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成任何影響。

實(shí)驗(yàn)注明：
1.  試劑準(zhǔn)備：所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫，使用后請(qǐng)立即按照說明書要求保存試劑。  實(shí)驗(yàn)操作中請(qǐng)使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
2.   加樣：加樣或加試劑時(shí)，請(qǐng)注意在吸取標(biāo)本 / 標(biāo)準(zhǔn)品，酶結(jié)合物或底物時(shí)，*個(gè)孔與zui后一個(gè)孔加樣之間的時(shí)間間隔如果太大，將會(huì)導(dǎo)致不同的 “預(yù)孵育"時(shí)間，從而明顯地影響到測量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。一次加樣時(shí)間(包括標(biāo)準(zhǔn)品及所有樣品)控制在10分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用多道移液器加樣。
3.   孵育：為防止樣品蒸發(fā)，試驗(yàn)時(shí)將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發(fā)；洗板后應(yīng)盡快進(jìn)行下步操作，任何時(shí)侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài);同時(shí)應(yīng)嚴(yán)格遵守給定的孵育時(shí)間和溫度。
4.   洗滌：洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水，同時(shí)要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響zui后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。
5.  試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請(qǐng)手甩幾下或少時(shí)離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請(qǐng)依據(jù)所需的量配置使用，并使用相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆。請(qǐng)精確配置標(biāo)準(zhǔn)品及工作液，盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時(shí)，一次不要小于10μl)，以避免由于不準(zhǔn)確稀釋而造成的濃度誤差；請(qǐng)勿重復(fù)使用已稀釋過的標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。
6.  反應(yīng)時(shí)間的控制：加入底物后請(qǐng)定時(shí)觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘)，如顏色較深，請(qǐng)?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)，避免反應(yīng)過強(qiáng)從而影響酶標(biāo)儀光密度讀數(shù)。
7.  底物：底物請(qǐng)避光保存，在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。
    建議檢測樣品時(shí)均設(shè)雙孔測定，以保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。
    如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高，請(qǐng)先稀釋后再測定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以稀釋倍數(shù)。

結(jié)果處理
    1.ELISA實(shí)驗(yàn)中樣品都要做復(fù)孔或三孔，然后計(jì)算每個(gè)濃度標(biāo)準(zhǔn)品的平均OD值，復(fù)孔的變異系數(shù)應(yīng)該小于20%。
　　2.平均OD值減去空白孔的OD值。
　　3.制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。
　　以減去本底后的OD值為X軸，標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為Y軸，利用作圖軟件得出一個(gè)合適的計(jì)算方法。建議使用合適的軟件來作圖，比如CurveExpert 1.4。這款軟件能夠給出很多種方法(比如直線、半對(duì)數(shù)、對(duì)數(shù)、四參數(shù)方程等)并從中選擇一條zui合適的方程。要想檢驗(yàn)?zāi)硹l曲線是否與表中數(shù)據(jù)吻合，可以將標(biāo)準(zhǔn)品的濃度作為未知數(shù)，將對(duì)應(yīng)的OD值帶入該方程，計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)品的濃度，得到的結(jié)果應(yīng)該與實(shí)際濃度很接近(+/-10%)。選擇擬合度zui高的那條曲線。