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呋喃代謝物檢測試劑盒介紹(四合一)

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具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)

產(chǎn)品型號(hào)96T

品牌

廠商性質(zhì)經(jīng)銷商

所在地上海市

更新時(shí)間:2017-04-24 02:22:54瀏覽次數(shù):1399次

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本套試劑盒有四種產(chǎn)品,采用間接競爭ELISA方法檢測組織、蜂蜜、牛奶等樣本中的呋喃類代謝物(AOZ、AMOZ、SEM、AHD),試劑盒由預(yù)包被偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板、辣根酶標(biāo)記物、抗體、標(biāo)準(zhǔn)品及其他配套試劑組成。

 

 

呋喃代謝物檢測試劑盒介紹(四合一)

(四合一)

 

 

1 原理及用途

 

本套試劑盒有四種產(chǎn)品,采用間接競爭ELISA方法檢測組織、蜂蜜、牛奶等樣本中的呋喃類代謝物(AOZ、AMOZSEM、AHD),試劑盒由預(yù)包被偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板、辣根酶標(biāo)記物、抗體、標(biāo)準(zhǔn)品及其他配套試劑組成。檢測時(shí),加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品溶液,樣本中的呋喃代謝物和酶標(biāo)板上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競爭抗呋喃代謝物抗體,加入酶標(biāo)記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光度值與其所含呋喃代謝物含量成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出樣本中呋喃代謝物的殘留量。

2 技術(shù)指標(biāo)

四種產(chǎn)品

加樣模式統(tǒng)一:50ul樣本/孔+50ul酶/孔+50ul抗體/孔。

反應(yīng)模式統(tǒng)一:25℃,45min~15min;(具體見“6 酶聯(lián)免疫試驗(yàn)步驟”)

前處理方法統(tǒng)一:即處理的一個(gè)樣本可分別用于檢測四種代謝物。做添加回收時(shí)也可以將四種高標(biāo)準(zhǔn)加入同一個(gè)樣本中,一次性處理后分別用于檢測四種代謝物。(具體見“5 樣本前處理”)

2.1 試劑盒靈敏度及檢測下限

*代謝物檢測試劑盒:0.02ppb(ng/ml)

組織、肝臟…………………………0.04ppb

蜂蜜、牛奶、腸衣…………………0.04ppb

魚/蝦等水產(chǎn)品組織因有一定干擾,定量下限為0.1ppb

呋喃它酮代謝物檢測試劑盒:0.05ppb(ng/ml)

組織、肝臟…………………………0.1ppb

蜂蜜、牛奶、腸衣…………………0.1ppb

魚/蝦等水產(chǎn)品組織因有一定干擾,定量下限為0.15ppb

*代謝物檢測試劑盒:0.05ppb(ng/ml)

組織、肝臟…………………………0.1ppb

蜂蜜、牛奶、腸衣…………………0.1ppb

    魚/蝦等水產(chǎn)品組織因有一定干擾,定量下限為0.15ppb

*代謝物檢測試劑盒:0.05ppb(ng/ml)

組織、肝臟…………………………0.1ppb

蜂蜜、牛奶、腸衣…………………0.1ppb

魚/蝦等水產(chǎn)品組織因有一定干擾,定量下限為0.15ppb

3 試劑盒組成

四種產(chǎn)品的“衍生化試劑、底物液A、底物液B、終止液、20X濃縮洗滌液、2X復(fù)溶液”成分統(tǒng)一,可以通用。

4 需要的器材和試劑

4.1 儀器:酶標(biāo)儀、打印機(jī)、均質(zhì)器 、氮?dú)獯蹈裳b置、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平(感量0.01g)

4.2 微量移液器:單道20µl-200µl,100µl-1000µl、多道300µl

4.3 試劑:乙酸乙酯、正己烷、鈉、濃HCl、K2HPO4·3H2O、亞硝基鐵(K2Fe(CN)5(NO)?2H2O)、ZnSO4·7H2O

5 樣本前處理

5.1 樣本處理前須知:

    實(shí)驗(yàn)中必須使用一次性吸頭,在吸取不同的試劑時(shí)要更換吸頭。實(shí)驗(yàn)之前須檢查各種實(shí)驗(yàn)器具是否干凈,必須使用潔凈實(shí)驗(yàn)器具,以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

5.2 配液:

配液1:0.36M亞硝基鐵溶液(牛奶、奶粉樣本)

11.9g亞硝基鐵加去離子水至100ml溶解。

配液2:1.04M硫酸鋅溶液(牛奶、奶粉樣本)

    29.8g硫酸鋅加去離子水至100ml溶解。

配液3:0.1M K2HPO4 溶液

    稱11.4g K2HPO4?3H2O加去離子水溶解定溶至500ml。

配液4:1M HCL

    8.6mL濃HCL加去離子水定容至100mL。

配液5:1M NaOH溶液

    稱取4g NaOH,加去離子水定容至100ml。

配液6:復(fù)溶液

    2×復(fù)溶液在使用前請按1:1稀釋。

5.3 樣本前處理步驟:

5.3.1 牛奶樣本處理方法

1)取5ml樣本于離心管中,加250ul 亞硝基鐵溶液(配液1)振蕩混合30秒,加250ul 硫酸鋅溶液(配液2)振蕩混合30秒,15℃4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘;

2)取上清1.1ml,加4ml去離子水、0.5 ml 1M 鹽酸溶液和100μl衍生化試劑,振蕩5分鐘;

3)在37℃過夜孵育(約16小時(shí))或50℃(超過50℃時(shí)會(huì)影響分層效果)水浴孵育3小時(shí);

4)分別加入5ml 0.1M K2HPO4 溶液,0.4ml 1M NaOH溶液和5ml的乙酸乙酯,振蕩5分鐘;

5)室溫下4000轉(zhuǎn)/分,離心10分鐘;

6)取出2.5ml的上層液到另一個(gè)離心管中,50-60℃氮?dú)饣蚩諝獯蹈桑?/span>

7)用1ml正已烷溶解殘留物,加入1ml復(fù)溶工作液充分振蕩混合30秒;室溫4000轉(zhuǎn)/分,離心10分鐘;

8)去除上層正已烷,取50μl下層液用于分析。

    樣本稀釋倍數(shù)為2

5.3.2 蜂蜜、組織、腸衣、肝臟樣本處理方法

1)稱取1±0.05g均質(zhì)樣于離心管中,加入4ml去離子水、0.5 ml 1M 鹽酸溶液和100μl衍生化試劑,振蕩5分鐘;

2)后續(xù)接“5.3.1 牛奶樣本處理方法,3)”

5.3.3 熟食樣本處理方法

1)稱取1±0.05g均質(zhì)樣于50ml離心管中,加入4.5ml甲醇和0.5ml去離子水,振蕩2min,室溫4000轉(zhuǎn)/分,離心5分鐘,去除全部液體;

2)加入5ml乙氰和5ml正己烷,振蕩2min,室溫4000轉(zhuǎn)/分,離心5分鐘,去除全部液體;

3)加0.5 ml 1M 鹽酸溶液和100μl衍生化試劑,振蕩5分鐘;

    注:熟食的添加回收試驗(yàn)請?jiān)诖瞬郊尤敫邩?biāo)準(zhǔn)。

4)后續(xù)接“5.3.1 牛奶樣本處理方法,3)”

6 酶聯(lián)免疫試驗(yàn)步驟

將所需試劑從4℃冷藏環(huán)境中取出,置于室溫平衡30min以上, 洗滌液冷藏時(shí)可能會(huì)有結(jié)晶需恢復(fù)到室溫以充分溶解,每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數(shù)量的微孔板及框架,將不用的微孔板放入自封袋,保存于2-8℃。

實(shí)驗(yàn)開始前需:將20×濃縮洗滌液用去離子水按1:19稀釋成工作洗滌液。

6.1 編    號(hào):將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔按序編號(hào),每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行,并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。

6.2 加樣反應(yīng):加標(biāo)準(zhǔn)品或樣本50µl/孔到各自的微孔中,然后加酶標(biāo)記物50µl/孔,再加抗體工作液50µl/孔,用蓋板膜封板,輕輕振蕩5秒混勻,25℃反應(yīng)45分鐘。

6.3 洗    滌:小心揭開蓋板膜,將孔內(nèi)液體甩干,用工作洗滌液250µl/孔充分洗滌5次,每次間隔30秒,用吸水紙拍干。

6.6 顯    色:每孔加入底物液A 50µl,再加底物液B 50µl,輕輕振蕩5秒混勻,25℃避光顯色15分鐘。

6.7終    止:每孔加入終止液50µl,輕輕振蕩混勻,終止反應(yīng)。

6.8測吸光值:用酶標(biāo)儀于450nm處測定每孔吸光度值(建議用雙波長450/630nm)。測定應(yīng)終止反應(yīng)后在10分鐘內(nèi)完成。

7 結(jié)果分析

7.1 百分吸光率的計(jì)算

    標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光度值的平均值(雙孔)除以*個(gè)標(biāo)準(zhǔn)(0ppb)的吸光度值,再乘以*,即

 百分吸光度值(%)=

A

×*

A0

A—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值

A0—0ppb標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值

7.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計(jì)算

 

呋喃代謝物檢測試劑盒介紹(四合一)

本套試劑盒有四種產(chǎn)品,采用間接競爭ELISA方法檢測組織、蜂蜜、牛奶等

48T,96T*,F(xiàn)F,ELISA,試劑盒

*(FF)ELISA試劑盒$r$n公司所銷售的試劑盒ELISA試劑盒。

48T,96T馬伊氏錐蟲,ELISA,試劑盒

馬伊氏錐蟲ELISA試劑盒$r$n公司所銷售的試劑盒ELISA試劑盒。

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