Firefly Luciferase Reporter Gene Assay Kit

螢火蟲螢光素酶報告基因檢測試劑盒

產(chǎn)品標簽

Firefly Luciferase 螢火蟲熒光素酶；Photinus pyralis；報告基因檢測；D-luciferin sodium D-熒光su鈉鹽；ATP生物發(fā)光檢測；CAS：61970-00-1；

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

螢火蟲螢光素酶（Firefly Luciferase）普遍用作一種報告基因來研究基因調(diào)控和功能，以及用于藥物篩選。由于哺乳動物細胞或組織缺乏任何內(nèi)源性的熒光素酶活性和生物發(fā)光的天然屬性，螢火蟲熒光素酶是一種非常靈敏的遺傳報告子。螢火蟲螢光素酶是一種分子量~61kD的蛋白，在ATP、鎂離子和氧氣存在的條件下，可以催化螢光素（Luciferin）氧化成氧化熒光素（Oxyluciferin），在此氧化過程中釋放出生物螢光（Bioluminescence）。這一熒光可通過化學發(fā)光儀（Luminometer）或液閃測定儀進行測定。

本螢火蟲螢光素酶報告基因檢測試劑盒（Firefly Luciferase Reporter Gene Assay Kit），正是利用螢光素為底物來檢測細胞內(nèi)螢火蟲螢光素酶活性的試劑盒，操作簡單、快速、靈敏且呈良好的線性關(guān)系。

產(chǎn)品組分

保存與運輸方法

保存：細胞裂解液置于4℃保存三個月有效，-20℃保存一年有效；螢火蟲熒光素酶檢測試劑置于-20℃六個月有效，-80℃避光保存一年有效；

運輸：冰袋運輸。

注意事項

• 為了保證螢火蟲熒光素酶檢測試劑的穩(wěn)定性，建議初次使用進行適當分裝，避光凍存，盡量降低反復凍融次數(shù)。內(nèi)部測試顯示反復凍融三次對測定結(jié)果無明顯影響。

• 由于溫度對酶活性有影響，測定時樣品和試劑均需達到室溫后再進行測定。

• 為取得加測定結(jié)果，用單管的化學發(fā)光儀測定時，樣品和試劑混合后到測定前的時間需盡量控制在相同時間，比如30s內(nèi)；使用具化學發(fā)光測定功能的多功能熒光酶標儀時，hao xian把樣品全部加好，然后統(tǒng)一加入螢火蟲熒光素酶檢測試劑。

• 樣品和試劑混合后，必須等待1~2s，再進行測定。測定時間通常為10s，根據(jù)情況可適當延長或縮短，但同一批樣品宜使用相同的測定時間。

• 為避免由于質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細胞效率差異引起的誤差，可同時轉(zhuǎn)入海腎熒光素酶報告基因質(zhì)粒作為內(nèi)參，用我司的雙熒光素酶報告基因檢測試劑盒（貨號：MF4010-100T）進行檢測。

• 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用方法

一、 細胞裂解

1.1 將含轉(zhuǎn)染有報告基因質(zhì)粒的細胞內(nèi)的培養(yǎng)基去除，對于貼壁細胞直接加PBS輕輕洗滌，對于懸浮細胞，低速離心收集細胞后用PBS輕輕洗滌。

1.2 將細胞裂解液充分混勻后，按下表用量來加入適量細胞裂解液，之后將培養(yǎng)板放在微型振蕩器上室溫震蕩15min，以充分裂解細胞。

1.3 將充分裂解后的產(chǎn)物于10,000~15,000rpm室溫離心3~5min，取上清用于測定。

二、 熒光素酶檢測

2.1 融解螢光素酶檢測試劑，并達到室溫。

2.2 按儀器說明書開啟化學發(fā)光儀或具有檢測化學發(fā)光功能的多功能酶標儀，設(shè)定參數(shù)，測定間隔設(shè)為2s，測定時間設(shè)為10s。

2.3 將細胞裂解產(chǎn)物按照20~100μl的體積加入測量管中（如果裂解產(chǎn)物足夠，請加入100μl；如果裂解產(chǎn)物不足可以適當減少用量，但同批裂解產(chǎn)物的使用量宜保持*）。

2.4 加入100μl螢光素酶檢測試劑，用槍打勻或用其它適當方式混勻后測定RLU（Relative light unit）。以細胞裂解液為空白對照。

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— —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】

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螢火蟲螢光素酶報告基因檢測  探針與染色

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