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原代細胞VS細胞系：

用酶或機械方法直接從人或動物組織中分離出來的細胞。嚴格來說，從機體分離出來到傳代之前的細胞稱為原代細胞，絕大部分的原代細胞在體外可以分裂10-15次(這與細胞的端粒長短有關)，再加上取材，成本等因素，通常會把培養(yǎng)的第一代到第十代以內(nèi)的細胞統(tǒng)稱為原代細胞。

?小鼠子宮韌帶成纖維細胞

商品屬性：

細胞簡介：

小鼠子宮韌帶成纖維分離自子宮韌帶組織，子宮韌帶是子宮附件的一部分，其主要功能是固定子宮，子宮韌帶共包括4條韌帶，分別是：子宮主韌帶、子宮闊韌帶、子宮圓韌帶、和骶子宮韌帶。子宮主韌帶為子宮闊韌帶下部兩層腹膜之間的一些纖維結締組織束和平滑肌纖維，較強韌，將子宮頸陰道上部連于骨盆側 壁，它是維持子宮頸正常位置，防止其向下脫垂的主要結構。骶子宮韌帶由平滑肌和結締組織構成，起自子宮頸陰道上部后面，向后繞過直腸的兩側，止于骶骨前面。此韌帶表面蓋以腹膜，形成弧形皺襞為直腸子宮襞。此韌帶向后上牽引子宮頸，并與子宮圓韌帶共同維持子宮的前傾前屈位。子宮闊韌帶位于子宮兩側的雙層腹膜皺襞，呈翼狀，由覆蓋子宮前后壁的腹膜自子宮側緣向兩側延伸達盆壁而成，可限制子宮向兩側傾倒。闊韌帶分為前后兩葉，其上緣游離，內(nèi)2/3部包 裹輸卵管(傘部無腹膜遮蓋)，外l/3部移行為骨盆漏斗韌帶(infundibulopelvic　ligament)或稱卵巢懸韌帶(suspensory ligament of ovary)，卵巢動靜脈由此穿行。在輸卵管以下、卵巢附著處以上的闊韌帶稱輸卵管系膜，其中有結締組織及中腎管遺跡。卵巢與闊韌帶后葉相接處稱卵巢系膜。卵巢內(nèi)側與宮角之間的闊韌帶稍增厚稱卵巢固有韌帶或卵巢韌帶。在宮體兩側的闊韌帶中有豐富的血管、神經(jīng)、淋巴管及大量疏松結締組織稱宮旁組織。子宮動靜脈和輸尿管均從闊韌帶 基底部穿過。子宮圓韌帶為一對長條狀圓索，由平滑肌和結締組織構成。起于子宮外側緣，輸卵管子宮口的前下方。在子 宮闊韌帶前層覆蓋下，走向前外側，經(jīng)過腹股溝管，終止于陰阜及大上部之中。為維持子宮前傾位的主要結構。

方法簡介：

實驗室分離的小鼠子宮韌帶成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

質量檢測：

實驗室分離的小鼠子宮韌帶成纖維采用 - 膠原酶混合消化法結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×105cells/瓶。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：基礎培養(yǎng)基，含FBS、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：成纖維細胞樣

傳代特性：可傳2-3代左右

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

原代細胞一般傳至10代左右，大部分細胞衰老死亡，但是有極少數(shù)的細胞能夠度過“危機"而繼續(xù)傳下去，存活的細胞一般能夠傳到40-50代，叫細胞株。當50代以后又會出現(xiàn)“危機"，這時有部分細胞的遺傳物質發(fā)生了改變且?guī)в邪┳兊奶攸c，從而可能無限制地傳代下去，稱為細胞系。

也有認為細胞系指原代細胞培養(yǎng)物經(jīng)傳代成功后所繁殖的細胞群體。也指可長期連續(xù)傳代的培養(yǎng)細胞。由此便引申出了后來的有限細胞系、無限細胞系，因此，細胞系狹義的是指可連續(xù)傳代的細胞，廣義是指可傳代的細胞。而細胞株是通過選擇法或克隆形成法，從原代培養(yǎng)物或細胞系中獲得具有特殊性質或標志物的單一細胞稱為細胞株。

細胞系具有容易培養(yǎng)、種類多、價格便宜、無限傳代等優(yōu)點，也非常容易在培養(yǎng)、凍存中發(fā)生錯誤鑒定及交叉污染的問題。

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原代細胞培養(yǎng)的具體步驟：

1、準備：取各種已消毒的培養(yǎng)用品置于凈化臺面，紫外線消毒20分鐘。開始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。

2、布局：點燃酒精燈，安裝吸管帽。

3、處理組織：把組織塊置于燒杯中，用Hanks液漂洗2-3次，去除血污；如懷疑組織可能污染，可先置于含有青的混合液中30-60分鐘。

5、消化：或用恒溫水浴，或置于37℃溫箱消化均可，消化中每隔20分鐘應搖動一次，如用電磁恒溫攪拌器消化更好。消化時間依組織塊的大小和組織的硬度而定。

6、分離：在消化過程中見消化液發(fā)混濁時，可用吸管吸出少許消化液在鏡下觀察，如組織已分散成細胞團或單個細胞，立即終止消化，隨即通過適宜不銹鋼篩，濾掉尚未充分消化開的組織塊。低速（500-1000轉/分）離心消化液5分鐘，吸出上清，加入適量含有血清的培養(yǎng)液。

7、計數(shù)：用計數(shù)板計數(shù)，如細胞懸液細胞密度過大，再補加培養(yǎng)液調整后，分裝入培養(yǎng)瓶中。對大多數(shù)細胞來說，pH要求在7.2-7.4范圍，培養(yǎng)液呈微紅色，如顏色偏黃，說明液體變酸，可用NaHCO3調整。

8、培養(yǎng)：置于37℃溫箱培養(yǎng)，如用CO2溫箱培養(yǎng)，瓶口需用紗布棉塞或螺旋帽堵塞，紗布塞易生霉菌，每次換液時需要換新塞。