目錄:上海帛科生物技術(shù)有限公司>>生化檢測試劑盒>>氧化磷酸化系列>> 轉(zhuǎn)氫酶2測試盒紫外分光光度法
| 貨號 | BK-01S6568 |
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特別提醒：本產(chǎn)品僅供科研研究使用，不得用于人體臨床直接檢測。
產(chǎn)品名稱：轉(zhuǎn)氫酶2測試盒紫外分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格：50管/48樣
檢測方法：紫外分光光度法
產(chǎn)品貨號：BK-01S6568
產(chǎn)品分類：氧化磷酸化系列
商品介紹：
測定意義: TH位于線粒體的內(nèi)膜上，又稱為線粒體復(fù)合體六，催化NADH+NADP+和NAD++NADPH相互轉(zhuǎn)化，調(diào)節(jié)線粒體NAD(H)和NADP(H)平衡。把逆向反應(yīng)稱為TH-2，催化NADPH和NAD+生成NADP+和NADH。 測定原理： NADH和NADPH均在340nm有特征吸收，因此TH催化的轉(zhuǎn)氫反應(yīng)不能導(dǎo)致340nm吸光度發(fā)生變化。用人工合成底物3-乙酰吡啶腺嘌呤二核苷酸（APAD+）替代NAD+，TH-2催化APAD+還原生成APADH，APADH在375nm有特征光吸收，測定375nm光吸收的增加速率，來計算TH-2活性。 需自備的儀器和用品： 可見分光光度計、臺式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。 |
所需的儀器和用品：
可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶（SOD）的測定：
建議正式實驗前選取 2 個樣本做預(yù)測定，了解本批樣品情況，熟悉實驗流程，避免實驗
樣本和試劑浪費！
1、樣本制備
① 組織樣本： 取約 0.1g 組織（水分充足的樣本可取 0.25g），加入 1mL 提取液，在 4oC 或冰浴進(jìn)行 勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min，取上清作為待測液。 【注】：若增加樣本量，可按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進(jìn)行提取
| ② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本： 先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；取約 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）； 12000rpm 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。 【注】：若增加樣本量，可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量（10 4）：提取液（mL）為 500~1000：1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本：直接檢測；若渾濁，離心后取上清檢測。 |
實驗方法學(xué)：
一、肝素的配制：
市售肝素凍干粉140單位/mg，1克瓶裝，每瓶140，000單位，稱取0.1克肝素凍干粉，加生理鹽水5ml，配成2800單位/ml。取50～100μl濕潤管壁，可抗凝人血3～5ml，血液不會凝固。老鼠血易凝固，所以最好更濃一些?？梢匀?.1克肝素凍干粉，加3ml生理鹽水溶解后，取50～100μl,可抗凝鼠血2～4ml。
肝素抗凝管的制備：取0.1克肝素凍干粉，加2.5ml生理鹽水。取100μl～150μl滴入塑料或玻璃管中，濕潤管壁，低于80℃小烤箱中（可以用烤面包的小烤箱），橫向轉(zhuǎn)動，每隔5～10分鐘轉(zhuǎn)動一次，直至干燥后放入4℃保存，可使2～5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集：
全血根據(jù)收集的條件，分成不抗凝和抗凝兩種。同時，不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清；抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1～2小時，直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血，輕輕顛倒充分抗凝后，可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征，選擇合適的抗凝劑。實驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。
選擇抗凝的注意點：
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致，同時所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒，充分抗凝，防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對較多（1ml抗凝全血能分離出0.4～0.5ml血漿）;
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后，解凍時可能會出現(xiàn)絮狀渾濁，如有則需要離心去掉渾濁后
用于測定。
50次 DNA電泳分子量標(biāo)準(zhǔn) (300-5000) DNAMETER（2） 4℃保存
2 ug pACT-Myd pACT-Myd 低溫運輸，-20℃保存
抗生素檢定培養(yǎng)基3號 Antibiotic Agar NO.3 250g
1瓶 CTLL-2細(xì)胞株 CTLL-2 低溫運輸和保存
GVPC瓊脂平板（9cm） GVPC Agar Base 10個/包
300U 蝦堿性 Shrimp Alkaline Phosphatase -20℃保存
250mL PIPES Buffer，1.0M, pH7.5 PIPES Buffer，1.0M, pH7.5 常溫保存
1mL 溶液,100mg/mL Actidione Solution -20℃保存
2 ug pPICZα FC pPICZα FC 低溫運輸，-20℃保存
膽汁七葉苷瓊脂 2ml*20支
2 ug pBV 222 pBV 222 低溫運輸，-20℃保存
轉(zhuǎn)氫酶2測試盒紫外分光光度法DOK5/IRS6 胞漿接蛋白Dok5抗體 規(guī)格: 0.2ml
DICER1/Dicer 核糖核酸Dicer抗體 規(guī)格: 0.1ml
eIF4E 真核翻譯起始因子4E抗體 規(guī)格: 0.1ml
Nucleoprotein/NP A型毒核蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
ADAM15 去整合素樣金屬蛋白15抗體 規(guī)格: 0.1ml
Socs 2 細(xì)胞因子信號傳導(dǎo)抑制蛋白2抗體 規(guī)格: 0.1ml
CPT1A 肉毒堿棕櫚?；D(zhuǎn)移1A抗體 規(guī)格: 0.1ml
APOH 載脂蛋白H抗體 規(guī)格: 0.1ml
PRDX1 過氧化還原1抗體 規(guī)格: 0.1ml
Phospho-Beta-Catenin(Ser45) 磷酸化β 連環(huán)素蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
Rabbit Anti-Goat IgM/PE-Cy7 PE-Cy7標(biāo)記的兔抗羊IgM 規(guī)格: 0.1ml
phospho-TERT(Ser1125) 磷酸化端粒逆轉(zhuǎn)錄抗體 規(guī)格: 0.1ml
注意事項：
1、試劑二為酶，不可冷凍，使用時在冰上放置。
2、對照管只需要做一管。
3、若對照管吸光值大于2，建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用（10μl試劑二原液+60μl蒸餾水）。
4、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管，對照管數(shù)值在什么范圍？
對照管的范圍是0.8-2。對照管吸光值過低可能是（1）試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用；（2)沒有按順序加試劑；（3）反應(yīng)時間不夠，可以延長反應(yīng)時間（反應(yīng)時間30min可以延長到40min）。對照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測定管大于對照管，可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大，為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測，通?？梢允箿y定正常。計算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
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