96孔板檢測(cè)示例

操作步驟

以下方案是使用StrandBrite Green定量RNA的示例。 打開(kāi)前讓所有組件升溫至室溫。處理所有材料時(shí)，務(wù)必使用干凈的一次性手套 使用無(wú)核酸酶水和無(wú)菌一次性聚丙烯塑料制品進(jìn)行試劑制備。

注意：沒(méi)有數(shù)據(jù)可用于解決StrandBrite Green RNA染色的致突變性或毒性。 因?yàn)檫@種試劑與核酸結(jié)合，所以應(yīng)將其作為潛在的誘變劑進(jìn)行處理，并進(jìn)行適當(dāng)?shù)奶幚怼?應(yīng)謹(jǐn)慎處理DMSO儲(chǔ)備溶液，因?yàn)橐阎狣MSO有助于有機(jī)分子進(jìn)入組織。

1.準(zhǔn)備1X測(cè)定緩沖液

通過(guò)用無(wú)菌，蒸餾，無(wú)核酸酶的水稀釋濃縮的緩沖液20X（組分B）來(lái)制備1X測(cè)定緩沖液。

2.準(zhǔn)備StrandBrite 綠色工作溶液

通過(guò)在1X測(cè)定緩沖液中將濃縮的DMSO溶液稀釋200倍來(lái)制備StrandBrite Green工作溶液。例如，將50μLStrandBrite Green（組分A）加入10 mL 1X測(cè)定緩沖液中（來(lái)自步驟1）。通過(guò)用鋁箔覆蓋或?qū)⑵渲糜诤诎抵衼?lái)保護(hù)工作溶液免受光照。

注1：我們建議將此溶液用塑料容器而不是玻璃制備，因?yàn)槿玖峡赡軙?huì)吸附到玻璃表面。

注2：為獲得佳結(jié)果，該溶液應(yīng)在制備后幾小時(shí)內(nèi)使用。

3.準(zhǔn)備RNA標(biāo)準(zhǔn)品的連續(xù)稀釋液（0至1μg/ mL）：

3.1將10μL100μg/ mL RNA原液（組分C）加入990μL分析緩沖液（組分B）中，得到1μg/ mL RNA溶液，然后進(jìn)行1：3連續(xù)稀釋，得到約1000,300， 100,30,10,3,1和0 ng / mL。

注意：未使用的核糖體RNA標(biāo)準(zhǔn)品（組分C）應(yīng)在無(wú)核酸酶的塑料瓶中分成單次使用的等分試樣，并儲(chǔ)存在-20℃。

3.2如說(shuō)明書(shū)中表1和2中所述，將RNA標(biāo)準(zhǔn)品和含有測(cè)試樣品的RNA添加到96孔固體黑色微孔板中。

4.運(yùn)行RNA測(cè)定：

4.1將100μLStrandBrite 綠色工作溶液（來(lái)自步驟2）添加到RNA標(biāo)準(zhǔn)品，空白對(duì)照和測(cè)試樣品的每個(gè)孔中（參見(jiàn)步驟3）中，使總RNA測(cè)定體積為200μL/孔。

注意：對(duì)于384孔板，每孔加入25μL樣品和25μLStrandBrite 綠色工作溶液。

4.2在室溫下孵育反應(yīng)2至5分鐘，避光。

4.3使用熒光分光光度計(jì)在Ex / Em = 490 / 545nm（515nm處的截止值）下觀察熒光增加。

注意：為盡量減少光漂白，請(qǐng)保持所有樣品的熒光測(cè)量時(shí)間不變。

4.4空白孔中的熒光（僅含測(cè)定緩沖液）用作對(duì)照，并從具有RNA標(biāo)準(zhǔn)品或測(cè)試樣品的那些比色皿的值中減去。根據(jù)RNA標(biāo)準(zhǔn)曲線確定樣品的RNA濃度。