樣品實(shí)驗(yàn)方案

簡(jiǎn)要概述

1.準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染細(xì)胞
2.制備轉(zhuǎn)染試劑-RNA 混合物
3.將轉(zhuǎn)染試劑-RNA 混合物添加到細(xì)胞培養(yǎng)物中
4.過(guò)夜培養(yǎng)細(xì)胞
5.用合適的方法分析轉(zhuǎn)染效率

細(xì)胞準(zhǔn)備

1.在轉(zhuǎn)染時(shí)將細(xì)胞培養(yǎng)至 ~ 90% 匯合。
2.轉(zhuǎn)染前更換新鮮培養(yǎng)基。例如，6 孔板每孔更換 2 mL 培養(yǎng)基，10 cm 板更換 6 mL 培養(yǎng)基。

工作溶液配制

1.T轉(zhuǎn)染試劑-RNA 混合物
2.將 2.5 µg mRNA 與 200 µL 無(wú)血清培養(yǎng)基混合。
3.在步驟 1 中加入 7.5 µL 轉(zhuǎn)染試劑。
4.混勻并在室溫下孵育 20 分鐘。
注意：轉(zhuǎn)染試劑與 mRNA 的比例需要針對(duì)不同的細(xì)胞系進(jìn)行優(yōu)化。 通常，轉(zhuǎn)染試劑 (µL) 與 mRNA (µg) 的比率 =（3 至 5 µL）至 1 µg。

6孔板樣品方案

操作步驟

1.轉(zhuǎn)染方案

1.1將轉(zhuǎn)染試劑 - mRNA 混合物加入培養(yǎng)板并培養(yǎng)過(guò)夜。
注意：重組蛋白表達(dá)可以在轉(zhuǎn)染后的8小時(shí)內(nèi)檢測(cè)到。 轉(zhuǎn)染后約24小時(shí)可觀察到表達(dá)水平。