在酶組織化學(xué) 研究中，仍需遵循標(biāo)本制作五大基本步驟，即固定或不固定的標(biāo)本、切片(冷凍或不冷凍)、孵育、顯色和顯微鏡下觀察。

    根據(jù)組織化學(xué)酶檢出的基本步驟。主要有以下5方面影響酶活性：

    1．選擇zui適溫度、pH及緩沖液。

    2．固定和切片標(biāo)本制作  由于固定液易使酶喪失酶活性，因此用不固定的冰凍切片顯示酶活性。切片厚度一般為8～12um，不超過(guò)40um，因?yàn)榍衅?0um以上時(shí)，浸透速度減慢，易出現(xiàn)人工假象。

    3．捕捉劑和激活劑  捕捉劑是形成zui終產(chǎn)物的基本條件，有Pb²⁺ 、Cu²⁺ 和Ba²⁺ 等，其中Pb²⁺ 廣泛應(yīng)用于磷酸酶、酯酶和轉(zhuǎn)移酶等酶反應(yīng)。凡能提高酶活性的物質(zhì)，稱為激活劑。

    激活劑分為三大類：

    (1)離子：多為金屬離子。一種激活劑對(duì)某種酶能起激活作用，但是可能對(duì)另一種酶起抑制作用；有時(shí)離子間也有拮抗現(xiàn)象，如Na⁺ 抑制K⁺ 的激活作用，Ca²⁺ 抑制Mg²⁺ 的激活作用等。

    (2)小分子化合物：某些還原劑可提高酶活性，例如半*和還原型*等能使酶分子中的雙硫鍵還原成硫氫基。

    (3)激活酶：指可使某些無(wú)活性的酶原變?yōu)橛谢钚缘拿浮?/p>

    4．抑制劑  指某些物質(zhì)在不引起酶蛋白變性的情況下，使酶活性減弱，甚至使酶活性消失。

    5．對(duì)照實(shí)驗(yàn)  為確定被檢酶是否具有特異性，以避免發(fā)生假陽(yáng)性或假陰性結(jié)果，同時(shí)要進(jìn)行對(duì)照實(shí)驗(yàn)。酶的性質(zhì)是指對(duì)其相應(yīng)的底物發(fā)生作用。如果有兩種或更多酶作用于同一底物時(shí)，需要用以下方法進(jìn)行酶反應(yīng)特異性的對(duì)照實(shí)驗(yàn)。

    (1)用酶的抑制劑確認(rèn)酶活性的對(duì)照實(shí)驗(yàn)。

    (2)除去底物對(duì)照實(shí)驗(yàn)：用去底物的孵育液進(jìn)行反應(yīng)。確認(rèn)反應(yīng)消失或明顯減弱。

    (3)陽(yáng)性對(duì)照實(shí)驗(yàn)：用已確定有某種酶存在的組織細(xì)胞與待測(cè)組織同時(shí)進(jìn)行反應(yīng)，兩者相互對(duì)照，以確認(rèn)酶活性的存在。