1、 ELISA服務(wù)流程

① 待測(cè)抗原/抗體的獲得;

② 抗原/抗體的包被;

③ 加入抗體/抗原，37℃溫育;

④ 底物液顯色;

⑤ 終止反應(yīng);

⑥ ELISA檢測(cè)儀檢測(cè)。

注：根據(jù)ELISA方法不同，操作步驟有區(qū)別。

2、 ELISA原理

酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(( Enzyme Linked Immunosor-ssay，ELISA)是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來(lái)的一種免疫技術(shù)，目前已被廣泛用于生物學(xué)和醫(yī)學(xué)科學(xué)的許多領(lǐng)域。ELISA原理是：抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記后，結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。在測(cè)定時(shí)，受檢標(biāo)本與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體，也通過(guò)反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例關(guān)系。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。測(cè)定方法具有很高的敏感度(pg – ng/mL水平)，并且重復(fù)性好。

3、 ELISA分類

①雙抗體夾心法測(cè)抗原;

②盡量選用新鮮的材料;

③實(shí)驗(yàn)材料涉及危險(xiǎn)品，loogene公司不予服務(wù);

④雙抗原夾心法測(cè)抗體(圖1);

⑤間接法測(cè)抗體;

⑥競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)抗體(圖2);

⑦競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)抗原;

⑧捕獲包被法測(cè)抗體;

⑨ABS-ELISA法;

⑩單克隆抗體+多克隆抗體;

單克隆抗體+單克隆抗體：是兩種單克隆抗體針對(duì)抗原上不同的、相距較遠(yuǎn)的兩個(gè)抗原決定簇，分別用于包被固相載體和制備酶結(jié)合物。

圖1 雙抗原夾心法測(cè)抗體

圖2競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)抗體

4、 ELISA所需材料

①ELISA試劑：包被緩沖液、洗滌緩沖液、稀釋液、終止液、底物緩沖液、TMB使用液、ABTS使用液、抗原、抗體和酶標(biāo)記抗體;

②耗材：

a: 聚苯乙烯塑料板(酶標(biāo)板)40孔或96孔;

b: 50ul及l(fā)00uL加樣器,tip頭;

c: 待測(cè)標(biāo)本(血清、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、滲出液、唾液、組織提取物合成、基因表達(dá)產(chǎn)物的樣品及參照物);

d: 面巾紙、洗滌瓶;

③ELISA檢測(cè)儀(酶聯(lián)檢測(cè)儀，圖3);

① 4℃冰箱;

⑤37℃溫育箱。

圖3酶聯(lián)檢測(cè)儀

5、ELISA所需材料

① ELISA測(cè)定的標(biāo)本十分廣泛，體液(如血清)、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、糞便)等均可作標(biāo)本，盡量選用新鮮血清樣本;

② 在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中均以血清作為檢測(cè)標(biāo)本;

③ 血清標(biāo)本可按常規(guī)方法采集，應(yīng)注意避免溶血，紅細(xì)胞溶解時(shí)會(huì)釋放出具有過(guò)氧化物酶活性的物質(zhì)，以HRP為標(biāo)記的ELISA測(cè)定中，溶血標(biāo)本可能會(huì)增加非特異性顯色;

④ 保存血清自采集時(shí)應(yīng)注意無(wú)菌操作，也可加入適當(dāng)防腐劑。

⑤ 實(shí)驗(yàn)材料涉及危險(xiǎn)品，loogene公司不予服務(wù);

⑥ 提供盡量詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)背景材料;

⑦ 在5天內(nèi)測(cè)定的血清標(biāo)本可放置于4℃，超過(guò)一周測(cè)定的需低溫凍存。

6、實(shí)驗(yàn)周期

① 1-10個(gè)樣本，5個(gè)工作日

② 10-100個(gè)樣本，10個(gè)工作日

③ 100個(gè)樣本以上，20個(gè)工作日

7、提供結(jié)果

完整的實(shí)驗(yàn)操作步驟、酶聯(lián)檢測(cè)數(shù)據(jù)等