生物樣本庫建設(shè)

定義

生物樣本庫biological specimen bank, BSB

標(biāo)準(zhǔn)化地收集、保存用于各種研究的正?；虿±順?biāo)本，包括人體器官組織、全血、血漿、血清、生物體液或經(jīng)處理過的生物樣本（DNA、RNA、蛋白等）以及與這些生物樣本相關(guān)的臨床、病理、治療、隨訪、知情同意等資料及其質(zhì)量控制、信息管理與應(yīng)用系統(tǒng)。

ISO標(biāo)準(zhǔn)

ISO15189:2003 醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力的要求

CNAS-CL02 醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室-質(zhì)量和能力的認(rèn)可準(zhǔn)則

ISO/IEC17025:2005 檢測和校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室能力的通用要求

CNAS-CL01 檢測和校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可準(zhǔn)則

ISO9001:2008/GBT19001-2008 質(zhì)量管理系統(tǒng) 要求

GB/T1.1-2009 標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫規(guī)則

實(shí)驗(yàn)室安全

GB 19489-2008 實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求 

CNAL/AC30-2005 實(shí)驗(yàn)室生物安全認(rèn)可準(zhǔn)則

WS/T233-2002 微生物和生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通用準(zhǔn)則

GB 50346-2004 生物安全實(shí)驗(yàn)室建筑技術(shù)規(guī)范

已建立實(shí)驗(yàn)室生物安全管理體系

臨床實(shí)驗(yàn)室

GB/T 20468-2006 臨床實(shí)驗(yàn)室定量測定室內(nèi)質(zhì)量控制指南

GB/T 20469-2006 臨床實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)總則

GB/T 20470-2006 臨床實(shí)驗(yàn)室室間質(zhì)量評價(jià)要求

WS/T102-1998 臨床檢驗(yàn)項(xiàng)目分類與代碼

WS/T224-2002 真空及其添加劑

WS/T225-2002 臨床化學(xué)檢驗(yàn)血液標(biāo)本的收集與處理

WS/T227-2002 臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程編寫要求

WS/T228-2002 定量臨床檢驗(yàn)方法的初步評價(jià)

WS/T230-2002 臨床診斷中聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）技術(shù)應(yīng)用

WS/T249-2005 臨床實(shí)驗(yàn)室廢物處理原則

WS/T250-2005 臨床實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量保證的要求

WS/T251-2005 臨床實(shí)驗(yàn)室安全準(zhǔn)則

WS/T255-2005 臨床檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)參考測量實(shí)驗(yàn)室

倫理

赫爾辛基宣言

涉及人類為研究對象的生物醫(yī)學(xué)研究了倫理方針指南

關(guān)于DNA序列申請zhuan li的聲明：zhuan li

關(guān)于早期發(fā)布原始序列數(shù)據(jù)有關(guān)專li申請問題的聲明

關(guān)于DNA取樣的聲明：控制與獲取

世界人類基因組與人權(quán)宣言

涉及人體的生物醫(yī)學(xué)研究倫理審查辦法（試行）

人類基因治療申報(bào)臨床試驗(yàn)指導(dǎo)原則

關(guān)于利益共享的聲明

關(guān)于基因治療的聲明

關(guān)于人類基因組數(shù)據(jù)庫的聲明

涉及人類的生物醫(yī)學(xué)研究倫理準(zhǔn)則

人類遺傳數(shù)據(jù)宣言綱要

人體生物醫(yī)學(xué)研究倫理指南

運(yùn)輸

物流術(shù)語

液氮生物容器

中國民用航kong危險(xiǎn)品運(yùn)輸管理規(guī)定

危險(xiǎn)物品航kong安全運(yùn)輸技術(shù)細(xì)則

標(biāo)本采集

生物標(biāo)本采集和儲(chǔ)存

   研究成功的關(guān)鍵

要求

根據(jù)所采樣本的類型和所分析的物質(zhì)而定

在采集和儲(chǔ)存過程中不能受到“污染”

儲(chǔ)存的生物標(biāo)本在任何時(shí)候進(jìn)行檢測都可以獲得一致的結(jié)果

所有的生物標(biāo)本都應(yīng)有詳細(xì)的背景材料和鑒別標(biāo)識(shí)

標(biāo)本采集

尿液標(biāo)本的保存- hao不超過2h

尿液化學(xué)物質(zhì)和有形成份不穩(wěn)定，排出后即開始發(fā)生物理和化學(xué)變化，如、尿膽原被氧化，細(xì)菌生長，尿素酵解生成氨使尿pH升高，尿液有形成份破壞，葡萄糖被細(xì)菌利用而降低。

尿液保存常用方法有兩種：

1.冷藏法：4℃條件下不超過8h

可抑制微生物生長，維持尿液pH恒定，使尿中有形成份的形態(tài)基本不變，但是可導(dǎo)致磷酸鹽和尿酸鹽析出形成沉淀，影響尿沉渣檢查。

標(biāo)本采集

尿液標(biāo)本的保存- hao不超過2h

  尿液化學(xué)物質(zhì)和有形成份不穩(wěn)定，排出后即開始發(fā)生物理和化學(xué)變化，如、尿膽原被氧化，細(xì)菌生長，尿素酵解生成氨使尿pH升高，尿液有形成份破壞，葡萄糖被細(xì)菌利用而降低。

尿液保存常用方法有兩種：

2.化學(xué)防腐法：

①甲苯：（一般用量為1.0～2.0ml甲苯/100ml尿液），防止細(xì)菌污染，通常用于尿酮體、尿糖，尿蛋白質(zhì)等測定

②甲醛：每100ml尿液加40%甲醛0.5ml，可抑制細(xì)菌生長并固定尿中有形成份，適用于尿液中細(xì)胞與管型的測定；

③：用10%的異丙醇溶液，達(dá)到抑菌及保護(hù)代謝物的作用，適用于尿鉀、鈉、鈣等測定

④濃鹽酸：每100ml尿標(biāo)本中加入濃鹽酸1ml即可，使尿液維持在pH 2.0左右。主要可用于17-羥皮質(zhì)類因醇、17-酮類固醇、兒茶酚胺、VMA等定量測定等。

標(biāo)本采集

標(biāo)本運(yùn)送

血液標(biāo)本采集后應(yīng)盡快從采血現(xiàn)場運(yùn)送至實(shí)驗(yàn)室，注意是否存在干擾血凝塊。

標(biāo)本運(yùn)送過程中要注意樣本的包裝、溫度要求及處理方法等，要確保分析成分的穩(wěn)定性，標(biāo)本管在運(yùn)送過程中要保持管口封閉，向上垂直放置，避免劇烈振動(dòng)

尿液標(biāo)本從流取到檢驗(yàn)應(yīng)在2小時(shí)內(nèi)完成，如不能及時(shí)送檢分析，必須加防腐劑或冷藏不超過8小時(shí)

細(xì)菌檢查標(biāo)本應(yīng)采用消毒容器，防止細(xì)菌污染，室溫條件不超過2小時(shí)或4℃冷藏保存。

標(biāo)本運(yùn)送

標(biāo)本處理和保存

標(biāo)本采集后應(yīng)及時(shí)處理、分裝后保存

血液標(biāo)本處理操作規(guī)程

DNA提取和純化操作規(guī)程：血液、糞便、棉拭子、唾液

RNA提取和純化操作規(guī)程：血液、棉拭子

蛋白質(zhì)提取和保存操作規(guī)程

標(biāo)本處理和保存

血液標(biāo)本處理操作規(guī)程

全血、血清、血漿、干血片、血凝塊、白細(xì)胞

全血：由液態(tài)血漿和血細(xì)胞組成

血漿：離開血管的全血經(jīng)抗凝處理后，通過離心沉淀，所獲得的不含細(xì)胞成分的液體，其中含有纖維蛋白原。

血清：指全血不經(jīng)抗凝處理，在凝固過程中，血漿中除去纖維蛋白原分離出的淡黃色透明液體或指纖維蛋白原已被除去的血漿

標(biāo)本處理和保存

血液標(biāo)本處理操作規(guī)程

全血標(biāo)本的保存

生化檢驗(yàn)：盡可能在2小時(shí)內(nèi)檢驗(yàn)或分離血清/血漿，不能及時(shí)分離或檢驗(yàn)時(shí)，應(yīng)4℃低溫冷藏，不能超過24小時(shí)。操作時(shí)動(dòng)作應(yīng)輕柔，避免劇烈振蕩，避免溫度變化過大或凍融，易導(dǎo)致溶血。

DNA檢測： 4℃保存不超過7天，-20℃保存不超過一年，-80℃保存

RNA檢測：采集后應(yīng)盡快分離血細(xì)胞、血清/血漿，或加入RNA抑制劑（如trizol）， -20℃保存不超過2個(gè)月，-80℃保存不超過半年。

標(biāo)本處理和保存

血液標(biāo)本處理操作規(guī)程

血清的分離

采血時(shí)應(yīng)采用無抗凝劑的；

采血后，室溫（22～25℃）放置30～60min，加促凝劑時(shí)凝集加快（5～15min)，1000～1200g離心10min，吸取上層淡黃色上清液。有凝膠屏障的分離管可保存在4℃ ，24小時(shí)內(nèi)吸取上層血清；無凝膠屏障的必須立即吸取上層血清。

保存條件

常溫下不超過8小時(shí)；4 ℃不超過48小時(shí)；48小時(shí)以上的應(yīng)置于-20℃保存；提取RNA的應(yīng)立即置于-80 ℃保存。避免反復(fù)凍融。

標(biāo)本處理和保存

血液標(biāo)本處理操作規(guī)程

血漿的分離

采血時(shí)應(yīng)采用有抗凝劑的；

采血后，1000～1200g離心10min，吸取上層淡黃色上清液。有凝膠屏障的分離管可保存在4℃ ，24小時(shí)內(nèi)吸取上層血清；無凝膠屏障的必須立即吸取上層血清。

保存條件

常溫下不超過8小時(shí)；4 ℃不超過48小時(shí)；48小時(shí)以上的應(yīng)置于-20℃保存；提取RNA的應(yīng)立即置于-80 ℃保存。避免反復(fù)凍融。

質(zhì)量控制

標(biāo)本入庫前應(yīng)經(jīng)過質(zhì)量控制，符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的標(biāo)本才能入庫

①符合標(biāo)本采集、處理的要求，檢查采集和處理記錄

②標(biāo)本信息采集表填寫完整

③標(biāo)本運(yùn)送符合要求，交接運(yùn)送記錄完整

④標(biāo)本管無空管、無破損、良好密封，標(biāo)簽清晰完整、無脫落

⑤檢查標(biāo)本是否受到污染，核酸質(zhì)量

標(biāo)本入庫

標(biāo)本編號(hào)原則

總原則：唯yi性、共享性

輔原則：在滿足總原則基礎(chǔ)上，盡量精簡，編號(hào)長度盡量保持統(tǒng)一

舉例：

2017年收到的第102份標(biāo)本，類型是糞便，目的用于結(jié)腸道菌群分析

  1700102D15W21

2017年收到的第256份標(biāo)本，類型是血清，目的用于心梗的研究

  1700256G01BS1  

生物安全

執(zhí)行《實(shí)驗(yàn)室生物安全管理體系》

健康監(jiān)測：定期體檢，必要時(shí)免疫接種。

個(gè)人防護(hù)：手套、口罩、、護(hù)目鏡；脫下手套后、離開微生物室前應(yīng)洗手，接觸血液體液或其它污染物時(shí)，應(yīng)立即洗手。操作尖銳物品如針頭，應(yīng)戴防ci破手套。

盡可能在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行標(biāo)本的操作。

標(biāo)本庫冰箱應(yīng)采用專人專鎖管理，禁止隨意取用，防止失竊。

感染性廢棄物交由專業(yè)環(huán)保公司處置。

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